源自hPSCs组织特异性血管内皮细胞回顾.docxVIP

简明回顾：组织特异性微血管内皮细胞源自人类多能干细胞 ABSTRACT 越来越多的证据提示不同组织类型的内皮细胞（ECs）具有显著的异质性，在组织的产生与动态平衡中起重要作用。近期的工作揭示出人类多能干细胞（hPSCs）中组织特异性微血管内皮细胞（TS-MVECs）的产生有可能产生组织特异性模型，这可能被应用于再生医学和体外模型应用中。本文中，我们回顾了到目前为止那些造就hPSC源性TS-MVECs的技术，并讨论现在的hPSC-EC分化流程可能是如何被引向组织特异性命运的。我们首先讨论活体中EC组织特异性的本质，并回顾了最近十年产生的一般性hPSC-EC分化流程。最后，我们描述了特异性是如何被整合到hPSC-EC流程中以在体外条件下产生hPSC源性TS-MVECs的，包括EC和实质细胞的共培养，引导性分化，以及引导重编程的策略。 INTRODUCTION 内皮细胞（ECs）衬于血管腔，不仅仅是一个被动屏障，而且是有功能的活跃性闸门，对微环境中的变化有动态反应。ECs位于循环血液成分与周围组织的交界处，在调控生理和病理过程中起关键作用，包括控制微血管通透性，血管生成，凝血，以及炎症。为了完成如此多样的功能，ECs在各个发育阶段，血管类型（即毛细血管，小动脉，小静脉），以及组织类型间表现出了很高的异质性（1）。 不同组织的微脉管系统在结构和功能水平上都是不同的，这是为了满足该组织的特定需求。举例来说，大脑中的ECs形成连续的，高度不可通透的屏障，即血脑屏障（BBB），目的是维持微妙的生化平衡以维持正常的脑部功能。相反，肝脏窦状小管的ECs高度不连续，以促进毒素从血流中清除，而肾小球的ECs有助于滤过血液内容物，以除去有害产物。 离体条件下产生组织特异性微血管内皮细胞（TS-MVECs），用于再生医学和组织建模应用，这有着巨大的利益。人类多能干细胞（hPSCs），特别是人类胚胎干细胞和诱导性多能干细胞（分别是hESCs和iPSCs）由于其可以分化成任何体细胞类型的能力，是产生TS-MVECs的一种有吸引力的来源。特别是hPSCs能产生自体同源细胞，并可用于研究离体条件下的人类组织发育机制，这使得它成为一种特别吸引人的TS-MEVCs的来源。 ???最近的十年中，使hPSCs向ECs分化的流程不断发展，增进了人们对人类ECs在生理和病理组织状态中所起作用的理解。近期，一些令人激动的新进展揭示了hPSCs向ECs的分化表现出组织特异性的特点。本篇回顾的目的就是总结这些进步，并提示出那些可能扩展TS-MVECs应用范围的有希望的方向。 活体中EC组织特异性的特点 理想的由干细胞产生的TS-MVECs应当与活体中的同类型细胞尽可能地匹配，匹配的方面有基因和蛋白质的表达，结构，以及功能特点。活体研究已经识别出了不同组织间毛细血管在组织（回顾见2）和功能（回顾见3）上的主要区别，提示有高度异质性，对这种异质性我们现在已经开始识别其分子基础。人们观察到在离体条件中缺乏微环境背景的情况下，原代培养的ECs去分化了，高达50%的这类细胞不再表达其组织特异性基因（4），这就产生了对离体条件下TS-MVECs特点进行描述的必要。 ECs的一个主要功能是释放组织特异性血管内分泌因子，支持组织的动态平衡与再生。举例来说，肝窦状小管ECs（LSECs）通过在时间和空间上控制血管内分泌信号，从而影响肝部分切除后肝脏的再生（5，6）。在肝切除后的LSECs中，Ang-2一开始是下调的（5），同时Wnt2和HGF是上调的（6），促进肝细胞的生长和增殖，之后Ang-2的表达逐渐恢复以促进血管形成（5）。在骨组织中，存在毛细血管ECs的亚型，H和L型ECs，它们在血管内分泌的反应上是不同的（7，8）。H型ECs释放细胞龛信号分子，支持骨祖细胞的生存与增殖（包括Pdgfa和Pdgfb），而L型ECs不分泌（7）。有趣的是，增加H型ECs细胞的数量增加了骨祖细胞的数量，也增强了骨的形成（7）。 ECs的另一个主要功能是调控离子，小分子，蛋白质，以及细胞的通透性。举例来说，高度不可通透的脑部ECs组成了血脑屏障，其特点是缺乏小窗，胞饮活动减少，表达极化的外流载体，并且跨内膜电阻很高（TEER）（回顾文章见9）。实际上，脑部毛细血管的TEER经测定高达~6000Ω×cm2，取决于受测动物的种类及年龄（10，11），与之相比外周血管的TEER仅有20Ω×cm2（12）。细胞旁通透性受紧密连接复合物控制，不同组织中这种复合物的表达是异质性的，并且组织也不同（13）。比如，高度不可通透的脑部ECs表达紧密连接蛋白封闭素（occludin）和claudin-5，而高度通透的LSECs不表达封闭素，仅异质性地表达claudin-5（14）。 基因微阵列已经被证明有助于识别EC组织特异性