携带人alpha突触核蛋白真核重组质粒构建及其SKNSH细胞表达的论文.docVIP

　　携带人alpha突触核蛋白真核重组质粒构建及其SKNSH细胞表达的论文 携带人alpha突触核蛋白真核重组质粒构建及其sknsh细胞表达 【关键词】 α突触核蛋白;质粒;帕金森病 【摘要】 目的 构建携带人alpha突触核蛋白真核重组质粒，检测其在人神经母细胞瘤sknsh细胞中的表达及对细胞存活率的影响。方法 pcr扩增alpha突触核蛋白基因，产物纯化后与pcdna3.1(+)载体进行连接反应, 构建pcdna3.1(+)/alpha突触核蛋白真核重组质粒。lipofectamine法转染人神经母细胞瘤sknsh细胞，rtpcr方法检测sknsh细胞中alpha突触核蛋白mrna的表达，四甲基偶氮唑盐(mtt)法检测其对细胞存活率的影响。结果 酶切鉴定及基因测序证明人alpha突触核蛋白基因已被完整、正确地插入到pcdna3.1(+)载体中。rtpcr 结果显示该表达载体转染sknsh细胞后，细胞内alpha突触核蛋白mrna的表达水平明显增高，mtt方法检测结果显示该表达载体转染并未引起细胞存活率的改变。结论 alpha突触核蛋白真核重组质粒构建成功, 并可在sknsh细胞内表达，且对细胞的存活率不产生任何影响，从而为进一步研究alpha突触核蛋白在帕金森病发病机制中的作用奠定了基础。 【关键词】 α突触核蛋白;质粒;帕金森病 construction of the eukaryotic expression plasmid of human alphasynuclein gene and its expression in sknsh cells he qing, du tingting, song ning, et al (department of physiology, shandong provincial key laboratory of pathogenesis and prevention of neurological disorders and state key disciplines: physiology, qingdao university medical college, qingdao 266071, china); [abstract] objective to construct the eukaryotic expression plasmid of human alphasynuclein gene and detect its expression in human sknsh neuroblastoma cells and its effect on cell viability. methods pcr ed to amplify the entire fragment of human alphasynuclein gene, and the amplified gene the neemediated gene transfection method an sknsh cells. rtpcr tt assay an alphasynuclein gene e digestion and sequencing methods. levels of alphasynuclein mrna id transfection. hoid of human alphasynuclein gene is successfully constructed and expressed in sknsh cells. the cell viability is not affected. all these results establish a foundation for a further study of the role of alphasynuclein in the pathogenesy of parkinson disease. 　　[key ids; parkinson disease 　　帕金森病(pd)是最常见的神经退行性疾病，发病率仅次于老年痴呆。.其主要的病理改变是黑质致密带多巴胺能神经元脱失及伴发的纹状体轴突末梢多巴胺的耗竭[1]。pd的发病机制目前还不清楚，可能与老龄、环境毒素、遗传因素、氧化应激、兴奋性毒素、神经营养因子缺失等因素有关[23]。近年来，蛋白质的异常修饰和错误折叠在神经系统退行性疾病发病中的作用越来越受到关注，被认为可能是神经细胞变性死亡的关键环节。alpha突触核蛋白为一种在健康人的脑组织中广泛分布的可溶性蛋白，被认为是pd发病机制中最重