梭子蟹变应原的分离、纯化的论文.docVIP

　　梭子蟹变应原的分离、纯化的论文 【摘要】 目的：对梭子蟹（portunus pelogicus(linnaeus)）变应原进行分离，鉴定其主要及次要变应原，采用蛋白纯化技术获取梭子蟹天然的主要变应原并进行鉴定，为标准化变应原疫苗的研制提供理论依据。方法：取常规方法制备梭子蟹浸出液，经sdspage分离，测定各组分的相对分子量；同时用26例对蟹过敏的病人血清进行ajor allergen from linnaeus 　　zhao qihua, edical college, guangzhou 510260, china 　　［abstract］ objective:to purify and characterize the major antigenic ponents of sand sming crab,and provide theoretical evidences for the research of standardization of allergenic vaccine.methods:the crude extract of linnaeus ethod, and electrophoresis of sdspage ary allergen proteins and secondary allergen proteins, fplc(gel chromatography and ion exchange chromatography) ming crab proteins olecular 13 000 to 90 000. major bands 26 crab allergenic subjects and contained 5 allergen bands altogether, and the bands of 74 400 and 48 700 ajor allergenic ponents. the positive rates of the tajor allergen proteins aintained the immunopetence after yielding from chromatography.conclusion:the 74 400 and 48 700 bands are the major allergens of sand sming crab. the major allergen proteins can be purified by chromatography. 　　［key 临床表现有腹痛、腹泻、呕吐、皮疹、鼻炎、头痛、血管性水肿、哮喘和威胁生命的过敏反应［1］。国外早有报道，职业性哮喘在雪蟹加工厂的工人中非常普遍，其皮试反应、血清中结合蟹提取物的特异性ige的升高与职业性哮喘存在显著的相关关系［2］。近年来，国外有资料报道，雪蟹第一个被鉴定的主要变应原的分子量是34 000［3］。也有报道显示，雪蟹的致敏蛋白条带是25 000～45 000、14 000或14 000以下，97 000、38 000～41 000［4］。梭子蟹俗名花蟹，属梭子蟹属，梭子蟹科，在动物分类上，属于节胶动物门甲壳纲，由于形似织布用的梭子和蟹壳呈花斑状而得名，是最常见的大型淡水经济蟹类，肉味鲜美，营养丰富，是人们的常见食品，在我国华南地区养殖业占有重要的地位。其变应原的纯化和鉴定国内外至今未见有报道。因此，我们选用梭子蟹进行分离纯化，获取梭子蟹天然的主要变应原，同时对其变应原特性进行鉴定，为标准化变应原疫苗的研制提供理论依据，以探讨对变态反应疾病更安全、更准确的诊断方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要试剂 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、过硫酸铵、sds、四甲基乙二胺（temed）、ta；蛋白标准品、pvdf膜购自biorad；tris购自roche；deaeff（二乙氨乙基快速弱阴离子交换剂）、sephadex g100购自pharmacia；其它试剂为国产分析纯试剂。 　　1.2 主要仪器 fplc（安玛西亚中国有限公司aktl）；低温离心机（hereaus multifuge 3sr）；制冷机（grant fm70）；分光光度计（安玛西亚ultrospec 2100 pro）；真空冷冻干燥机（labloncol freezone 6升立式真空泵195）；凝胶成像系统（biorad huniversal hood ⅱs.n 76s/00417）；直流稳压器（biorad）；垂直板电泳槽（biorad miniprotean 3 cell）；转膜电泳槽（biorad minitransblot）。 　　1.3 梭子蟹