激活LXR对海马神经元神经甾体合成的促进作用的论文.docVIP

　　激活LXR对海马神经元神经甾体合成的促进作用的论文 作者：张淑坤，杨荣慧，张翠欣， 姜玲玲，侯艳宁 【摘要】 目的： 研究 肝x受体（lxr）激活对海马神经元神经甾体合成的 影响 . 方法 ：将大鼠海马神经元体外培养至第7日，在培养液中加入2.0 μmol/l to901317，继续培养48 h. 应用 高效液相质谱联用（hplcms）分离测定培养液中游离型神经甾体孕烯醇酮（preg）、脱氢表雄酮（dhea）和结合型神经甾体孕烯醇酮硫酸酯（pregs）、脱氢表雄酮硫酸酯（dheas）的含量；rtpcr方法观察海马神经元p450侧链裂解酶（p450scc）、甾体合成快速调节蛋白（star）和3β羟基甾醇脱氢酶（3βhsd）等神经甾体合成关键酶基因的mrna的表达. 结果： to901317激活lxr，促进p450scc，star和3βhsd的mrna表达，增加海马神经元培养液中神经甾体preg，dhea，pregs和dheas含量. 结论： lxr激活时，可通过上调海马神经元 p450scc，star和3βhsd的mrna表达，促进神经甾体的合成. 【关键词】 肝x受体；p450侧链裂解酶；神经甾体；海马, 神经元 　　【abstract】aim: to investigate the effect of liver x receptor (lxr) activation on the synthesis of neurosteriod in hippocampal neurons. methods: on day 7 of culture, hippocampal neurons ol/l to901317 dissolved in dimethylsulfoxide for 48 h. the mrna expressions of p450 side chain cleavage (p450scc), steroidogenic acute regulatory protein (star) and 3βhydroxysteroid dehydrogenase (3βhsd) easured by rtpcr and the contents of unconjugated neurosteriods pregnenolone(preg), dehydroepiandrosterone(dhea) and conjugated neurosteroids pregnenolone sulfate(pregs), dehydroepiandrosterone sulfate(dheas) in medium ined using highperformance liquid chromatographymass spectrometry (hplcms). results: incubation of hippocampal neurons rna and the levels of preg, dhea, pregs and dheas. conclusion: activation of lxr contributes to the synthesis of neurosteriod by upregulating the expressions of p450scc, star and 3βhsd in hippocampal neurons. 　　【keye; neurosteroid; hippocampus; neurons 　　0引言 　　中枢神经系统的胆固醇在甾体合成快速调节蛋白（star）的引导下被转运到线粒体内膜，然后由p450侧链裂解酶（p450scc）催化生成孕烯醇酮（preg），后者在3β羟基甾醇脱氢酶（3βhsd）等的催化下转化成脱氢表雄酮（dhea），preg和dhea在磺基转移酶的催化下生成结合型神经甾体孕烯醇酮硫酸酯（pregs）和脱氢表雄酮硫酸酯（dheas），发挥生物效应. 体外培养海马神经元和小鼠阿尔茨海默病（ad）模型均表明，用人工合成配体to901317激活肝x受体（lxr）能增加其下游基因atp结合盒转运体a1（abca1）的表达，阻止ad发生 ［1-2］. 本实验旨在观察lxr激活时对海马神经元神经甾体的合成和分泌有何影响. 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　dmem、优级胎牛血清（hyclone公司）；l左旋多聚赖氨酸、阿糖胞苷、二甲基亚砜、to901317（sigma公司）；胰蛋白酶（gibco公司）；trizol（美国invtrogen公司）；逆转录试剂盒（美国promega公司）；pfu dn