热休克蛋白60对小鼠树突状细胞功能影响的论文.docVIP

　　热休克蛋白60对小鼠树突状细胞功能影响的论文 【摘要】 目的：探讨动脉粥样硬化中重要炎性物质——热休克蛋白60(hsp60)体外对小鼠树突状细胞(mdc)功能影响。方法：小鼠骨髓提取dc，体外培养成熟后与两种浓度mhsp60孵育，动态观察dc突起改变；流式细胞仪检测孵育前后mdc表面标志改变；mlr测定孵育前后mdc刺激功能变化；elisa法测定mlr上清液中细胞因子浓度。结果：孵育后，mdc突起增加明显；cd11c+、cd80及cd86表型显著增加；淋巴细胞刺激功能明显增强；分泌细胞因子il12、ifnγ增加（plt;0.01）而il4增加不明显(pgt;0.05)，ifnγ/il4比值升高。结论：mhsp60体外可以促进mdc功能，作用呈剂量依赖性。 【关键词】 热休克蛋白60 树突状细胞 动脉粥样硬化 表型 细胞因子 　　effect of heat shock protein 60 on murine dendritic cell function in vitro 　　ent of cardiology, union hospital, tongji medical college, huazhong university of science and technology, matory factor in atherosclerosis, on the maturation of murine dendritic cells(mdcs) in vitro.methods:myeloid mdcs mouse marroature hsp60.the morphological changes etric analysis; the stimulating capacity ined in allogenic mixed lymphocyte reaction(mlr); elisa dcs and stimulated lymphocyte in the medium of mlr.results:dendrites of mhsp60dcs raised obviously. the expression of costimulating factor cd11c+, cd86, cd80 ulating capacity of mhspdcs in mlr phocytes cocultured hspdcs in mlr secreted higher levels of proinflammation cytokines(ifnγ, il12) but there ulatory action hsp60 progressed the maturation of mdc dosedependently in vitro. 　　［key gmcsf和rmil4购自biosource公司；fitcanti mouse cd11c+、peanti mouse cd80及peanti mouse cd86购自biolegend公司；mhsp60购自stressgen公司；il4、ifnγ、il12 elisa试剂盒购自rd公司。完全培养基包括：rpmi1640(gibco公司)，20%胎牛血清(gibco公司)，青霉素100 u/ml，链霉素100 u/ml，20 ng/ml rmgmcsf，20 ng/ml rmil4。 　　1.2 方法 　　1.2.1 小鼠骨髓dc培养 参照文献［4］方法稍做改进。简言之，取小鼠股骨和胫骨，去掉骨两端，用5 ml注射器吸取rpmi1640液冲洗髓腔，收集所得液体，200目尼龙网过滤后，trisnh4cl溶解红细胞，细胞悬于20%胎牛血清rpmi1640培养液中，种植于50 ml培养瓶中，置于37℃、5%co2孵育箱中，过夜后，弃去悬浮细胞，再加3 ml新鲜完全培养基，37℃、5%co2温箱培养，隔天半量换液，每次换液均保留细胞悬液直至第9天。 　　1.2.2 实验分组及细胞处理 将培养第9天的细胞分为3组：①对照组：培养液加pbs；②高剂量组：培养液加mhsp60 10 μg/ml；③低剂量组：培养液加mhsp60 3 μg/ml。3组均孵育24小时后保留细胞悬液。 　　1.2.3 形态观察 培养3、5、9和10天，用倒置显微镜，电镜和fitcanti cd11c+荧光染色后在荧光显微镜下观察dc形态。 　　1.2.4 流式细胞仪检测（fasc） 收集细胞调整密度为1×106 ml-1，每管为100 μl，加入标记抗体fitccd11c+、pecd80及pecd86，各0.1 μg，4℃孵育20分钟，pb