猪囊尾蚴cDNA文库的免疫学筛选和新基因的论文.docVIP

　　猪囊尾蚴cDNA文库的免疫学筛选和新基因的论文 【摘要】 目的 从猪囊尾蚴cdna文库中筛选免疫学阳性蛋白的编码基因，为临床猪囊尾蚴患者的免疫学诊断提供特异的重组抗原。方法 用脑囊尾蚴病人血清免疫学筛选猪囊尾蚴cdna文库，阳性克隆经pcr技术扩增噬菌体载体中插入的dna片段，并将其克隆入pmd18t质粒载体中，测序结果与genbank中的核苷酸序列进行同源性分析。结果 血清免疫学筛选后，从猪囊尾蚴cdna文库中挑取了4个阳性斑，pcr后4个片段大小约在200～1800 bp，3个大的片段测序结果经分析表明均含有完整开放阅读框，同源序列分析结果显示获得的3个基因片段与genbank中已知的猪囊尾蚴蛋白基因无同源性。结论 本试验中所发现的基因均是猪囊尾蚴新基因，为进一步基因克隆、表达和鉴定等研究奠定了基础。 【关键词】 囊尾蚴； 基因文库； 克隆，分子； 序列分析 【基金项目】 安徽省高等学校青年教师科研资助计划自然科学项目(2006jq1094)；安徽医科大学科学技术研究基金项目(2006kj08) 　　immunoscreening of taenia solium metacestodes cdna library and discovery of nein, guang shengfang, ent of parasitology, anhui medical university, hefei 230032, china; 2.anhui college of traditional chinese medicine, hefei 230038, china; 3.school of public health, anhui medical university, hefei 230032, china; 4.luan peoples hospital, luan 237005, china 　　【abstract】objective to discover neethods taenia solium metacestodes cdna library munoscreened ixture serum of taenia solium neurocysticercosis. the 4 positive clones plified pcr t vector and folloblparasites database and genbank datebase by blastn and blastx. results a total 4 positive clones ly selected for sequencing. from these clones, 3 estquality sequences s, and had no matches in the database of taenia solium metacestodes. conclusions ne metacestodes have been discovered. it provides the basis for further study on its immunological diagnosis. 　　【key metacestodes; gene library; cloning, molecular; sequence analysis (chin j dis control prev 2008，12(1)：47) 囊尾蚴病是由猪带绦虫的中绦期囊尾蚴引起的一种危害严重的人畜共患寄生虫病。.该病呈世界性分布，以发展中国家较为多见；我国人体囊尾蚴病分布广泛，据新近统计在29个省(区/市)的675个县市有流行［1～3］。 　　目前，临床上尤其是深部组织的囊尾蚴病主要依赖于血清免疫学及影像学进行诊断。市售猪囊尾蚴病诊断试剂主要是用虫体抗原检测病人血清中的循环抗体，易与其他寄生虫病产生交*反应，且虫源抗原短缺，应用受到一定的限制。 本研究采用脑囊尾蚴病人血清筛选囊尾蚴cdna文库，从中筛选出阳性克隆，测出其抗原的编码基因，并在表达载体对其进行克隆、表达和鉴定，进一步对纯化的重组蛋白的抗原特性、诊断价值进行研究。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　猪囊尾蚴cdna文库、猪囊尾蚴病人血清、大肠杆菌xl1blue均由安徽医科大学寄生虫学教研室保存提供。 　　1.2 主要试剂 　　hind iii、bamh i和pmd18t克隆载体购自大连宝生物公司，辣根过氧化物酶标记羊抗人igg购自北京中杉金桥公司。琼脂糖凝胶dna纯化回收试剂盒、质粒提取试剂盒购自北京道普生物科技有限公司。琼脂糖为丹麦litex 公司产