磁分离酶联免疫荧光法（MEIF）检测人血清中胰岛素的论文.docVIP

　　磁分离酶联免疫荧光法（MEIF）检测人血清中胰岛素的论文 【摘要】 　　目的: 采用磁微粒分离酶联免疫荧光（meif）分析技术建立一种简便、 高敏感性、 定量检测人血清胰岛素(insulin)的新方法。方法: 选用2株识别人胰岛素不同表位的单克隆抗体(mab)。一株mab用异硫氰酸荧光素（fitc）标记, 另一株用碱性磷酸酶(ap)标记; 偶联羊抗fitc抗体的磁珠用作固相分离载体, 4-甲基磷酸伞型酮用作荧光底物。结果: 成功建立了定量检测人血清胰岛素的meif, 灵敏度2.0 μiu/ml, 线形范围0～188.52 μiu/ml, 批内变异系数(cv)为4.3%～5.2%, 批间cv为2.6%～9.5%, 稀释回收率为93%～117%, 加标回收率为94%～113%。实际样品的测定结果与倍爱康公司商品化人insulin磁分离发光系统检测试剂盒的检测结果比较, 具有良好的相关性。结论: meif定量测定人insulin方法成本低、 灵敏度高、 稳定性好, 在临床免疫检测领域具有广阔的应用前景。 【关键词】 酶联免疫分析 免疫荧光 4-甲基磷酸伞型酮 磁珠 胰岛素 　　establishment of the magic separation enzyme immunofluorescence method for detecting insulin 　　xie jing, liu zhen-shi, hu shan, cai ru-xiu, yang hai, yang xiang-liang* 　　college of life science and technology, huazhong science and technology university, : to establish a convenient and sensitive magic separation enzyme immunofluorescence (meif) method for detecting human insulin. methods: tonoclonal antibodies (mabs) agic solid phase separation. magic beads ethylumbelliferyl-phosphoric acid (4-mup) elf for detecting insulin. results: the sensitivity of this assay l, the linear range 0 μiu/ml to 188.52 μiu/ml, and the intra-assay variation and inter-assay variation agic enzyme chemiluminescence immunoassay system. conclusion: the meif for detecting insulin is lomune detection. 　　［keye immunoassay; immunofluorescence; 4-methylum-belliferyl-phosphoric acid; magic beads; insulin 　　糖尿病是我国最常见的内分泌疾病, 发病率约为1.3‰, 我国每年约有2.7万新增患者。.糖尿病给患者家庭和社会带来巨大的经济损失（每年高达100亿人民币）和沉重的精神伤害［1］。随着人们生活水平的提高和生活方式的改变, 糖尿病发病趋于年轻化［2］。血清胰岛素（insulin）含量测定是糖尿病诊断和治疗过程中重要的血清检查项目, 对于糖尿病的诊断和治疗具有重要意义。常规检测胰岛素的方法主要有放射免疫法和酶联免疫吸附法等, 但存在着放射污染或灵敏度低, 操作复杂等不足。本研究旨在建立一种检测人血清胰岛素的新方法-磁分离酶免疫荧光法(magic enzyme immunofluorescence, meif), 实现对人血清胰岛素的定量、 敏感和快速检测。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 4-甲基磷酸伞型酮（4-mup）购自sigma公司。磁分离试剂、 洗液、 胰岛素标准品及抗人胰岛素单克隆抗体（mab）fitc和ap连接物由北京倍爱康生物技术有限公司提供。二乙醇胺（dea）和三乙醇胺（tea）购自fluka公司。victorⅲ型荧光检测仪为珀金埃尔默(perkinelmer)公司产品。专用于酶标板的磁分离器为自行研制。 恒温箱为上海实验仪器公司产品。白色未标记酶标板为greiner microlon生产。 　　1.2 方法 　　1.2.1 mab标记物的工作浓度选择 将倍爱康公司提供的fitc标记抗人胰岛