细胞器的分级-分离.pptVIP

; 细胞器的分级分离;[目的要求];[实验原理] ; 细胞器的分离常通过组织细胞匀浆、分级分离和分析三个步骤完成。 分级分离方法有两种，即：差速离心法和密度梯度离心法。;[实验用品];[实验步骤];2.细胞器的分级分离 (1)细胞核的分离： 第一次:1000rpm,8min。 (2)细胞核的纯化 在沉淀中加入0.34mo1/L蔗糖-0.5mmol/L Mg(Ac)2至2ml，混悬。用长针头注射器在混悬液下轻轻加入2ml 的0.88mo1/L蔗糖-0.5mmol/L Mg(Ac)2溶液。尽量使两种溶液明显分层。 2000rpm离心8min。;显微镜下观察结果;(4)线粒体的分离 将分离细胞核时收集的上清以10000 g 离心10 min，将上清移入1.5 ml Ep管内并置冰上或4℃冰箱待用。沉淀用0.25 mol/L的蔗糖溶液重悬后，10000 g离心10 min，重复1次，取沉淀。;(2)线粒体的鉴定  于洁净载玻片上滴1滴0.02％～1％的詹纳斯 绿B染液，用牙签挑取线粒??沉淀均匀涂于染液中，染色5～10 min，盖上盖玻片，镜检。;[结果与分析;[注意事项];[作业与思考题]