ABORhD血型定型检测试剂卡的操作规划.docVIP

ABO/RhD血型定型检测试剂卡操作规程 【试验目的和原理】 ABO血型鉴定是通过检测被检者红细胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被检者血浆中是否存在抗A和/或抗B抗体（反定型）来确定。 对于成年个体被检者，红细胞上的A和/或B抗原与血浆中的抗A和/或抗B抗体存在一种对应关系。其独特性质在于：红细胞上缺乏A和/或B抗原，则血清中存在与所缺乏的抗原对应的强反应性抗体，如红细胞上缺乏A抗原，则可以预见血浆中存在抗A抗体。 常规的ABO定型必须包括正定型（红细胞定型）和反定型（血浆定型），并将正反定型结果相互验证，只有正反定型结果一致时才能准确定型。 Rh阳性和阴性的鉴定是通过检测被检者的红细胞上是否有D抗原，有D抗原为Rh阳性，没有D抗原则为Rh阴性。 ABO/RhD血型定型检测试剂卡 采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，将生物化学的凝胶分子筛过滤技术、离心技术和血???血清学的抗体特异性结合在一起，其中抗A凝胶管中灌注了含抗A抗体的凝胶，抗B凝胶管中灌注了含抗B抗体的凝胶，抗D凝胶管中灌注了含IgM抗D抗体的凝胶。A细胞、B细胞及Ctr管中灌注了不含血型抗体的凝胶，抗A、抗B及抗D凝胶管用于红细胞上A、B及D抗原检测，而A细胞、B细胞及Ctr管用于检测血浆中的抗体。当抗原抗体反应时，凝集的红细胞在离心力的作用下不能通过凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中，呈现阳性反应；而抗原抗体没有反应时，未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部，呈现阴性反应 【ABO/RhD血型定型检测试剂卡的用途】 1、用于输血前检测 （1）鉴定ABO，以备选择 ABO血型相配合的血液用于交叉配血。 （2）鉴定RhD血型，以备选择RhD血型相配合的血液用于交叉配血。 2、用于围产期检查 （1）用于产前夫妇的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产前预测。 （2）用于产后母子的ABO、RhD血型检测，进行新生儿溶血病产后诊断。 3、用于常规ABO、RhD血型化验检查，如健康体检等。 【样本要求】 1、建议使用抗凝的血样，尤其是EDTA抗凝管采集的血样，需要量2ml 。（EDTA抗凝采血管为紫帽管）。 2、血液样本在采集后48小时以内检测。 【所需仪器设备及耗材】 1、 Rh血型分型卡（含抗C、抗c、抗D、抗E、抗e及自身阴性对照） 2、血型血清学离心机（用于离心分离血浆、洗涤红细胞） 3、微柱凝胶卡离心机 4、微量移液枪及吸头 【试验操作】 按照下列步骤进行操作 一、被检血液样本的处理及反定型A型、B型红细胞的准备 步骤操作1EDTA抗凝的血液样本离心（900-1000g）1分钟，将上清血浆转入一支12 ? 75-mm 试管中，余下的压积红细胞备用。如果血浆有不溶物（如混入的红细胞）或不澄清透明，则需要将血浆再次离心，直到澄清透明不含不溶物为止。2另取一支12 ? 75-mm 试管中，加入0.1ml上述步骤1中的压积红细胞 ，用生理盐水洗涤一次，弃上清，得到压积红细胞。3在一支12 ? 75-mm 试管中，加入1ml生理盐水（或Liss液），加入步骤2中得到的压积红细胞10微升，混匀得到0.8-1%浓度的被检红细胞。4 将反定型A及B红细胞用生理盐水调节到0.8-1%浓度。二、ABO、RhD定型 步骤操作1取ABO/RhD血型定型检测试剂卡 一片，注意检查外观，确保凝胶管的凝胶上层存在液面，凝胶不会干枯。将符合要求的卡进行标记，按照试验需要撕开封口膜。2用微量移液枪分别向抗A、抗B、抗D孔及Ctr孔的每孔样品槽中沿样品槽内壁呈45°角缓慢加入50微升0.8-1%浓度的被检者红细胞。3 向A细胞孔中加入50微升0.8-1%浓度的A型红细胞。 4向B细胞孔中加入50微升0.8-1%浓度的B型红细胞。5分别向A细胞、B细胞、Ctr孔中加入25微升被检者血浆。6在台面交替轻叩卡左下角和右下角，确保所加入的液体在卡的样品槽中呈水平状态，而不是偏向一侧。7将卡放入微柱凝胶卡离心机离心，LB-3000低速离心机第一档离心5分钟，判读结果并记录。【结果判读及解释】 1、反应阴、阳性的判读 反应图反应强度4+3+2+1+双群阴性红细胞分布凝集红细胞在凝胶顶部表面，呈线条形凝集红细胞开始进入凝胶，但集中在凝胶顶部及上半部分凝集红细胞进入凝胶内部的中下部分凝集红细胞集中在凝胶下半部分，且向底部集中离心后凝集的红细胞位于凝胶顶部；而阴性红细胞集中在微管底部所有红细胞通过凝胶，沉积在微孔底部 必须注意：如果红细胞发生凝集，预期其凝集强度≥2+ ; 如果反应弱于2+则需要进一步试验才能准确定型。