n肝癌细胞蛋白差异凝胶电泳技术系统评估方法.pdfVIP

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2017-05-01 发布于未知
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n肝癌细胞蛋白差异凝胶电泳技术系统评估方法.pdf

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n肝癌细胞蛋白差异凝胶电泳技术系统评估方法.pdf

2 2 32 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 第 34卷分析化学 ( FENX I HUAXUE) 　研究简报第 11期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2006年 11月 Chinese Journal of Analytical Chem istry 1519～1523 肝癌细胞蛋白差异凝胶电泳技术系统评估方法方勤美 1, 2, 3 　孙薇 2 　焦丽燕 2 　钱小红 2 　姜颖 2 　夏春 1 　贺福初 2 1 (中国农业大学动物医学院 ,北京 100094) 　　2 (军事医学科学院放射医学研究所 ,北京 100850) 3 (福建省农业科学院 ,福洲 350001) 摘　要　利用二维差异凝胶电泳技术 ( two dimensional differential in gel electrophoresis, 2D D IGE)研究肝癌细胞与正常细胞的差异时应先对其蛋白样品进行标记系统评估以确保正式实验的成功。在细胞水平上展开蛋 2 2 2 2 , 白质组研究应尽可能提取到细胞的所有蛋白 ,为此本研究先比较了机械刮除法、胰酶消化法和 PBSE消化法收获肝癌细胞后的细胞形态与蛋白得率 ,结果显示 PBSE消化法收集肝癌细胞时细胞形态完整 ,提取的蛋白得率最高。然后将提取的细胞蛋白经 D IGETM试剂盒的 3重荧光 (Cy2、Cy3、Cy5)标记后再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS PAGE)和双向电泳 (2DE, two dimensional electrophoresis) 。前者图像使用 ImageQuant软件进行分析 ,结果说明肝癌细胞蛋白提取液与该染料能相互兼容 ,样品得到了有效的标记。2DE的扫描图像使用 DeCyder 5. 0软件的胶内分析 ( differential in gel analysis, D IA)和胶间分析 ( biological variation analysis, BVA)模