利用TRIzol试剂及液氮提取大鼠胰腺高质量总RNA.doc

第30卷第 5期 西安交通大学学报 (医学版 ) Vol. 30 No. 5 2009年 10月Journal of Xipan Jiaotong University (Medical Sciences) Oct. 2009 利用 TRIzol ó试剂和液氮提取大鼠胰腺高质量总 RNA 李冬民 1,2 ,任吴超 1,2 ,王　璇 1,2 ,王飞苗 1,2 ,高　玉 1,2 , 韩　燕 1,2 ,宁启兰 1,2 ,宋天保 1,3 ,吕社民 1 ,2 (西安交通大学医学院 :1.环境与疾病相关基因教育部重点实验室 ;2.遗传学与分子生物学系 ; 3.人体解剖学与组织胚胎学系 ,陕西西安　 710061) 摘要 :目的　建立胰腺高质量总 RNA快速、经济、稳定的提取方法。方法　应用 TRIzol ó试剂和液氮提取大鼠胰腺总 RNA ,通过总 RNA含量和 A260/ 280比值的测定及 10 g/L非变性琼脂糖凝胶电泳评估总 RNA的质量 ,并用 RT2PCR检 测大鼠胰岛素 1、胰高血糖素、胰α2淀粉酶和 β2actin的表达。结果　利用 TRIzol ó和液氮提取的大鼠胰腺总 RNA量 可达到 3～6μg/ mg胰腺组织 ,A260/ 280比值在 1. 75～1. 89之间。在 10 g/L非变性琼脂糖凝胶电泳时 ,均可见 28S及 18S条带 ,并且在 28S、18S条带间可见明显的云雾状阴影。大鼠胰岛素 1、胰高血糖素、胰α2淀粉酶、 β2actin RT2PCR 产物电泳结果显示均有清晰的条带。结论　应用 TRIzol ó试剂和液氮成功地提取了大鼠胰腺高质量的总 RNA ,后者 可用于 RT2PCR研究。 关键词 :大鼠胰腺 ;总 RNA提取 ; TRIzol ó试剂 ;液氮 中图分类号 :Q813　　　文献标志码 :A　　　文章编号 :167128259 (2009) 0520639204 , REN Wu2chao1 ,2 , WAN G Xuan1 ,2 , WAN G Fei2miao1,2 HAN Yan1,2 , NINGQi2lan1 ,2 , SON G Tian2bao1 ,3 (1. Key Laboratory of Environment and Genes Related to Diseases , Ministry of Education of China/ A method with TRIzol ó reagent and liquid nitrogen to extract high2quality RNA from rat pancreas LI Dong2min1,2 , GAO Yu1,2 , ,L B She2min1 ,2 Medical School of Xipan Jiaotong University , Xipan 710061 ; 2. Department of Genetics and Molecular Biology , Medical School of Xipan Jiaotong University , Xipan710061;3. Departmentof HumanAnatomy, Histology and Embryology , Medical School of Xipan Jiaotong University , Xipan 710061 , China) ABSTRACT : Objective　To establish a quick , economical and reproducible method for high2quality RNA extraction from pancreas. Methods　We utilized TRIzol ó Reagent and liquid nitrogen to isolate total RNA from the rat pancreas. The RNA quality was determined by detection of its content and optic density ( A) at 260/ 280 nm , and electrophoresis in 1 % non2denatured agarose gel. Then reverse transcription2polymerase chain reaction (RT2 PCR) was performed to detect