茶多酚对HL60-VCR细胞多药耐药的逆转作用的论文.docVIP

　　茶多酚对HL60/VCR细胞多药耐药的逆转作用的论文 茶多酚对hl60/vcr细胞多药耐药的逆转作用 【关键词】 多药耐药;hl60/vcr;茶多酚;bcl2; bax 【摘要】 目的 探讨中药茶多酚(tp)对多药耐药细胞系hl60/vcr多药耐药的逆转作用。方法 hl60细胞反复暴露于浓度递增的长春新碱(vcr)培养液中,建立多药耐药细胞系hl60/vcr;不同剂量tp处理hl60/vcr细胞，mtt法检测tp对hl60/vcr 细胞多药耐药的逆转作用;流式细胞仪检测tp对hl60/vcr细胞p糖蛋白(pgp)，多药耐药蛋白(mrp)，人肺耐药蛋白(lrp)表达的影响;rtpcr检测tp对hl60/vcr 细胞bcl2基因表达的影响。结果 hl60/vcr细胞系对多种化疗药物产生耐药;pgp 在hl60/vcr 细胞中的相对荧光强度(rfi)明显高于hl60 细胞，是hl60 细胞的24.65倍;hl60/vcr的bcl2 mrna表达水平增高，bax mrna表达水平下降;5 μg/ml tp使hl60/vcr细胞对vcr、阿霉素(adr)、vp16的耐药逆转倍数分别为2.367、1.490和1.667;7.5 μg/ml tp使hl60/vcr细胞对vcr、adr、vp16的耐药逆转倍数分别为9.057、2.257和6.004;tp剂量依赖性地降低hl60/vcr细胞mrp表达的影响;5、7.5 μg/ml tp可下调hl60/vcr细胞bcl2 mrna表达水平。.结论 hl60/vcr细胞对多种抗癌药耐药，其多药耐药的机制可能与增加pgp的表达水平及增加bcl2/bax比值有关;tp对多药耐药细胞hl60/vcr具有逆转作用，可能的机制是降低pgp的表达水平，下调bcl2 mrna表达。 【关键词】 多药耐药;hl60/vcr;茶多酚;bcl2; bax 　急性白血病患者体内抗凋亡蛋白bcl2表达增高〔1〕，抑制肿瘤细胞凋亡，从而导致肿瘤细胞多药耐药(mdr)。han〔2〕发现，磷酸化的蛋白激酶(akt)通过上调bcl2表达，导致胃癌细胞的mdr。采用长春新碱反复短期暴露法处理人白血病细胞株(hl60),建立了mdr细胞系hl60/长春新碱(vcr)。茶多酚(tp)具有清除活性氧、自由基的功效，具有抗癌、抗心血管疾病、提高机体免疫功能、延缓衰老等功能。有研究发现〔3〕，tp及其单体表没食子儿茶素通过减弱mdr1基因表达，抑制p糖蛋白(pgp)atp酶活性，逆转人口腔表皮癌细胞株(kba1)的mdr性。tp对hl60/vcr基因表达的影响未见报道。本研究用不同浓度的中药tp处理hl60及hl60/vcr细胞，探讨tp逆转hl60/vcr细胞mdr的可能机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　vcr(上海华联制药公司)、阿霉素(adr，连云港制药厂)、阿克拉霉素(acr，深圳万乐药业公司)、vp16(连云港制药厂)、高三尖杉酯碱(hht，杭州民生)、长春地辛(vds，杭州民生)，tp(浙江莫干山制药厂，纯度≥99%)。噻唑蓝(mtt，sigma公司)，逆转录酶，trizol试剂(invitrogen公司);rpmi1640(gibco公司);小牛血清(杭州四季青公司); 100 bp dna ladder(bebco公司);兔抗人pgp，兔抗人多药耐药蛋白(mrp)，兔抗人肺耐药蛋白(lrp)，异硫氰酸荧光素( fitc)标记二抗(中山生物技术公司)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞株及培养条件 　　hl60细胞株保存于本室。细胞于含10%新生小牛血清的rpmi1640培养液中，37℃,全湿度，5% co2培养箱培养。 　　1.2.2 mdr细胞系hl60/vcr的建立 　　〔4〕 取对数生长期hl60细胞,在含2 μg /ml vcr的rpmi1640完全培养液中，37℃，全湿度co2培养箱培养2 h，然后将细胞移至无药条件下培养，待细胞恢复生长后，反复用vcr处理，同时增加药物浓度，直到获得耐药性，维持培养于1 μg /ml的培养液中。进行各项实验前，细胞无药培养7 d。 　　1.2.3 mdr检测 　　选用vcr、adr、vp16、hht、vds、acr等6种药物进行检测。对数生长期hl60/vcr和hl60细胞悬液1×105/ml，接种于96孔板，每孔0.1 ml。每种化疗药物在100 μg/ml至0.01 μg/ml间按1∶10逐级稀释成6个浓度梯度，每种浓度各加5复孔。37℃,全湿度，5% co2培养箱培养48 h。mtt法计算出半数抑制浓度(ic50)及耐药倍数(rf)