微生物综合实验的设计的方案2.docVIP

微生物综合实验设计方案 第八小组 （曹婉仪 蔡楚萍 贝锦涛 张韵红） 取样 取三个经高压蒸汽灭菌的锥形瓶，于华师校园内湖中取水样。分别选取三个取样点（韵红：取样点需要再精确到确切地点吧，如：取样点1：…取样点2：…取样点3：…还有取样点选取的依据是不是也要交代），分别编号1.2.3，于水面以下10cm，取水各100mL，盖好瓶塞。 器具：三角瓶*3个 二、测水体pH值 为了大致地确定水体微生物的生长适宜pH（个人感觉这说法有点奇怪，好像暗示测出来的pH就是适宜生长的pH似的，至少改为：为了了解华师湖水的pH吧，或者改为其他更好的说法），取好水样后，分别用pH计测量三个水样的值，每个水样各测量三次，取平均值。 将三个水样混合均匀，得到混合水样，用pH计测量pH三次，取平均值。 器具：pH计 分离提纯2种微生物 1、材料：混合水样 2、方法 操作名称具体步骤试剂和材料器具（经高压蒸汽灭菌）配置牛肉膏蛋白胨固体培养基400mL1、配置牛肉膏蛋白胨固体培养基400mL，分装于两个三角瓶 2、高压蒸汽灭菌 （灭菌材料：250ml三角瓶*5，培养皿*？，试管*11，1ml移液管*5,10mll量筒*1） 3、倒10个平板2支试管斜面（按原来写的也要13个平板，怎么会是10个，而且还没有设置对照的平板；如果要作×10000，还要更多平板。我觉得做15~20个平板比较好。斜面是不是做4个比较好啊）NaCl 2g 蛋白胨4g 牛肉膏1.2g 400mL水 1mol/LNaOH 1mol/L HCI (pH7~7.6)高压蒸汽灭菌锅 天平 玻璃棒 500ml大烧杯*1个 250ml三角瓶*2个 封口膜*2张 绳子*2条 培养皿*？套（数目有待确定，看倒多少个平板） 试管*4个 胶塞/棉塞*4个 报纸多张稀释涂布分离细菌（微生物吧，这里还不是细菌）1、取0.2ml混合水样进行稀释，设置四个梯度：原液、×10、×100、×1000，分别装于4个试管中，标明稀释度，每种稀释度5ml（万一微生物太多，可能需要×10000，我觉得多做一个比较保险） 2、涂布四个平板（八?需要每个稀释度做两个平板吗？万一污染怎么办？） 3、37℃恒温培养箱中倒置培养24h混合水样 蒸馏水 空白平板*4个（用于涂布分离，若做×10000，则为5个）恒温培养箱 1ml移液管*5个 10ml量筒 试管*4个（若做×10000，则为5个） 酒精灯 酒精棉球 涂布器 标签纸平板划线分离细菌（不一定是细菌吧）1、选取稀释涂布平板操作中分离程度较好的两种微生物的（一种是细菌，另一种是要做什么微生物啊？）平板菌落（要说明是否要来自同一稀释度吧），进行平板划线，各划线2个平板 2、37℃恒温培养箱中倒置培养24h（若另一种微生物不是细菌，可能就要改一下培养时间吧？）涂布分离的平板 空白平板*4个恒温培养箱 酒精灯 酒精棉球 接种环 标签纸平板划线分离细菌（不一定是细菌吧）1、两种微生物均选取划线操作效果好的菌落，进行第二次平板划线操作，各划线2个平板 37℃恒温培养箱中倒置培养24h（若另一种微生物不是细菌，可能就要改一下培养时间吧？）第一次划线分离的不同菌种的平板*2个 空白平板*4个恒温培养箱 酒精灯 酒精棉球 接种环 标签纸平板菌种接种到试管保藏1、用接种环把菌种接种到试管斜面，每个菌种接种2个斜面 2、37℃恒温培养箱中培养24h（若另一种微生物不是细菌，可能就要改一下培养时间吧？） 3、待菌种在固体斜面培养基上生长丰满后，注明菌类或菌种名、保藏日期、保藏人，然后置于4~8℃的冰箱中保存第二次划线分离的不同菌种的平板*2个 空白斜面培养基*4个恒温培养箱 冰箱 酒精灯 酒精棉球 接种环 标签纸 四、革兰氏染色 细菌的革兰氏染色 1、制片：涂片：滴1滴无菌水于载玻片，挑取少许菌体与水滴均匀混合；干燥：火焰上方略加温；固定：用加热法，通过火焰3次 2、染色：结晶紫初染1min，水洗；碘液媒染1min，水洗；95%乙醇脱色20~30s，水洗；番红复染1min，水洗 3、镜检 材料：第二次划线分离的不同菌种的平板*2个 试剂：无菌水、结晶紫、碘液、95%乙醇、番红 器具：载玻片、接种环、酒精灯 五、观察细菌的形态特征 在高倍镜和油镜下观察细菌形态，拍下照片，画图，描述形态特征 器具：显微镜 六、生理生化试验（淀粉水解、糖酵解） （1）淀粉水解实验 以无菌操作技术，把两个菌种接种到同一个平板上，划成“+”字形，平板的一边接一个种 在平皿底部做好记号，盖上盖，37℃恒温培养箱中倒置培养24h 平皿盖打开，滴加卢卡氏碘液于接种处 记录结果：有水解圈：淀粉水解实验阳性，用+表示；无水解圈：淀粉水解实验阴性，用-表示 (2)糖酵解实验