第13章流式细胞技术教程.pptx

临床免疫学检验技术;第十三章 流式细胞分析技术 ;目 录;目 录;目 录;概 述;第一节 流式细胞仪的分析及分选原理;一、概 述;二、经典流式细胞仪 ;经典流式细胞仪的结构;（二）分析工作原理 荧光染色待测单细胞悬液 进样器系统 液流 细胞流 驱动系统 流动室 鞘 液 单细胞流 检测区域 激光 激发细胞 荧光素 PMT/PD检测器 信号放大 FSC/SSC 计算机 信号转换、储存和分析。 ;液流系统和液流聚焦示意图;;光学系统、样品激发和FSC检测;光学系统、样品激发和SSC检测;;光学系统和荧光检测; （三）分选工作原理 单细胞流 流动室 超声压电晶体高频振动 散射光 单细胞液滴 选定细胞群体 荧光信号 加载电荷 偏转高压静电场 液滴偏转 进入分选收集管，完成细胞分选 数据储存，分析。 ;细胞悬液形成液流柱;;二、量化成像分析流式细胞仪 ;（二）分析工作原理 细胞悬液 注射泵 流动室 液流聚焦 系统鞘液 LED照射 极限层流 抑制细胞搏动、翻转 明视野细胞形态 固态激光 TDI CCD捕获信号 散射光和荧光信号 计算机分析系统 细胞明视野、荧光图像和流式分析图;量化成像分析流式细胞仪结构、原理 ;细胞核转位检测;三、质谱流式细胞仪;质谱流式细胞仪结构简图;（二）分析工作原理 金属元素偶联抗体 标记细胞 进样器 雾化系统 单细胞雾化液滴 离子源 原子电离 带电粒子 高频交变电磁场 雪崩式放电 涡流电流 离子云形成 ICP-TOF检测 计算机系统 数据处理和分析 经典流式细胞仪图;质谱流式细胞仪工作原理 ;质谱流式常用标记元素;常用外周血抗CD分子抗体标记元素;质谱流式细胞仪结果分析;第二节 数据的显示与分析;一、参数;二、散射光的测定;二、散射光的测定;三、荧光测量;流式检测示意图;（二）荧光补偿 荧光补偿是指不同的荧光素由于发射光谱重叠，因此在检测的时候有串色现象，通过减去重叠部分的光，使检测器检测到的光能量是真正的某一荧光素产生的光能量。;四、数据显示方式 ;（二）双参数图 二维散点图、密度图和等高图;（三）多维参数的显示 假三维图和三参数点图 ;三参数以上的显示 主要要依据设门技术进行分析;（四）设门分析技术 Gate设置：指在某一张选定参数的直方图上，根据该图的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并要求该样本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况。 Reg