高效液相色谱波长转换法测定西红花苷.docVIP

　　高效液相色谱波长转换法测定西红花苷 作者：付建武，彭红，周玉春，黄丽芸 【摘要】 目的采用hplc波长转换法测定栀子药材中西红花苷-1和栀子苷的含量。方法色谱柱为agilent zorbax eclipse xbd-c18，流动相为乙腈∶水(梯度洗脱) ，流速为1 ml/min，检测波长为238 nm（0～20 min）;440 nm（20～40 min），柱温为30℃,采用20 min转换检测波长。结果栀子苷在4.52～180.8 μg范围内, r=0.999 9，西红花苷-1在0.9～9.0 μg范围内，r=0.999 7，与色谱峰面积呈线性关系。平均回收率分别为99.52％，100.76%,rsd分别为1.10%，1.41%。结论该测定方法具有简便、稳定、准确、重复性好的特点。 【关键词】 高效液相法； 栀子苷； 西红花苷-1 　　abstract：objectiveto determine the jasminoidin and saffloethodsusing re-hplc n,the mobile phase ixture of acetonitrile-l/min, and the uv detection (0～20 min)and 440nm(20～40 min),and the tempetature in.resultsirisflorentins of the drugs shol and 0.9～9.0μg/ml respectively(r=0.999 9,0.999 7).the average recoveries ethod is simple,stable,accurate and repeatable. 　　key inoidin； daffloinoides ellis的干燥成熟果实。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱: agient zorbax eclipse xbd-c18（4.6 mm×250 mm,5 μm），流动相:a(乙腈),b(水)。0～20 min,va∶vb=10～90;20～40 min,va∶vb=20～40,二元梯度洗脱。检测波长：238 nm（0～20 min）；440 nm（20～40 min），柱温：30℃，流速:1 ml/min，进样量：10 μl。 　　2.2 波长转换点及梯度洗脱程序的考察 　　根据栀子中环烯醚萜苷类和西红花苷类化合物的极性差异，在分段考察该两类成分梯度分离条件的基础上，优化并确定了梯度洗脱程序。 　　反复调节流动相梯度，使环烯醚萜苷类和西红花苷类各色谱峰均具有较好的分离度，确定梯度洗脱程序。由于238 nm色谱峰集中在0～18 min, 440 nm色谱峰集中在22～60 min。因此，选取20 min为检测波长转换点，采用hplc系统中的操作软件进行程序设定，使检测波长由238 nm变为440 nm，在同一色谱条件下同时检测栀子中的环烯醚萜苷类和西红花苷类成分的含量。图1表示的是在此优化条件下得到的图谱。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　取栀子药材50℃干燥12 h,粉碎,过40目筛。取粉末约0.1 g,精密称定,置圆底烧瓶中,精密入甲醇-水(50∶50)25 ml,回流提取60 min,放冷,再称定重量，用50%甲醇补足失重，摇匀，过滤,精密量取续滤液2 ml置10 ml量瓶中，用50%甲醇定容，摇匀，经0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。 　　2.4 对照品溶液的制备 称取栀子苷对照品适量，精密称定，用甲醇制成每毫升含栀子苷20.6 μg的溶液，得栀子苷对照品储备液，同样条件下制成每毫升含18 μg西红花苷-1的溶液，得西红花苷-1对照品储备液。分别取上述各贮备液适量，用甲醇定容，制成每毫升含栀子苷50 μg、西红花苷-1为4 μg的混合对照品溶液，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为混合对照品溶液。进样，得到各对照品色谱图。结果见图2～4。 　　2.5 方法学考察 　　2.5.1 线性关系考察精密吸取对照品储备液适量，加甲醇适量，分别配制成不同浓度的对照品溶液：栀子苷：2.42，4.52，22.6，45.2，90.4，180.8 μg/ml；西红花苷-1：0.9，1.8，3.6，5.4，7.2，9.0μg/ml。在确定的色谱条件下分别测定不同浓度栀子苷和西红花苷-1对照品，平行测定3次，以峰面积对对照品系列浓度进行回归，绘制标准曲线，结果表明，栀子苷在4.52～ 180.8 μg/ml之间与峰面积线形关系良好，回归方程为：a=13.585c+3.688，r=0.999 9；西红花苷-1在0.9～9.0 μg/ml之间与峰面积线形关系良好，回归方程为：a=1