三种丙型肝炎包膜感染性假病毒颗粒的制备及初步应用研究_张柯.pdfVIP

DOI :10.13242/j .cnki .bingduxuebao.001930 第 24 卷 　第 4 期 病 　　毒 　　学 　　报 Vol.24 　 No.4 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　 2 0 0 8 年 7 月 CHINES E JOURNA L OF VIRO LOGY July 　　　2008 三种丙型肝炎包膜感染性假病毒颗粒的制备及初步应用研究 张柯1 , 谭文杰1 ＊ , 邓瑶1 , 李津2 , 吴小兵1 , 阮力1 (1 .中国疾病预防控制中心 　病毒病 预防控制所 , 北京 　100052 ;2 .中国天坛生物制 品总公司 , 北京 　100024) 摘要 :本研究构建携 带 HCV 代表株 H77(1a)、中国 HeBei 株(1b)以及 JFH-1 株(2a)丙型肝炎病毒完整的 E1-E2 包 膜糖蛋白基因的表达质粒 , 间接免疫荧光法及 Western blo t 验证 了其在 细胞膜(293 细胞)上 的正确 表达 。 三种 包 膜质 粒分别与慢病毒包装质粒 pH R′CM V ■8 .2 及携带 EGF P 报 告基因的自灭活(Self-Inactivating , SIN)转移质 粒 pCS-CG 共转染 293F T 细胞 , 产生三种不同基因型 的丙型 肝炎包 膜感染 性假型(pseudoty ped)病毒 颗粒 , 免疫荧 光 与 Western blo t 分析验证了 E1/ E2 包膜糖蛋白在假病毒颗粒上的 表达与掺入 , 利 用 p24 EL ISA 法及感 染性实 验 对 HCV 假病毒进行滴定 。 从上清中获得的 HCV 假病 毒可以 在体外 感染肝 癌细胞 系 H uh7 及 H uh7-CD81(且 后 者上的感染效率约为前者上的 2 ～ 3 倍);利用针对 HCV E2 蛋白的具有广谱交叉中和活性的单克隆抗体 A P33 建 立了基于上述假病毒颗粒的丙肝病毒体外 中和抗 体滴 定方法 , 并 应用 于丙型 肝炎 患者 体内的 中和 抗体水 平的 研 究 。 本研究成功包装了包括中国流行株在内的 3 种不同基因型的 HCV 包膜感染性假病毒颗粒并建立了基于假 病 毒颗粒的 HCV 体外中和抗体检测方 法 , 为研究 HCV 感染 早期特 性及特 异抗病 毒药物 的体外筛 选提供 了有效 模 型 , 并可用于 HCV 感染者体内及 H CV 基因工程疫苗免疫后中和抗体水平的分析 。 关键词 :丙型肝炎病毒 ;中和抗体 ;假病毒 中图分类号 :R373.1 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :1000-8721(2008)04-0287-08 　　丙型肝炎病毒是引起输血 相关肝炎及慢 性肝 身的高突变特性使得疫苗的研发困难重重 ;对 H CV 炎 、肝硬化 、肝癌的主要病原 。 据 WH O 统计 , 全世 感染早期事件(病毒进入及其受体)与机体抗病毒免 界 H CV 感染者超过 1 .7 亿 , 每年全球新发感染者 疫应答的研究尚不够深入 。 约为 350 万人[ 1] 。而在中国 , HCV 感染者亦近四千 作为获得性免疫的第一道防线 , 体液免疫尤其 万(3 .2 %)[ 2] 。流行病学研究表明 , H CV 感染者中 是中和抗体在 阻断 H CV 感 染和免疫 清除中 的作 约 60 %～ 80 %将发展为慢性持续性感染 ;约 20 %的 用 , 长久以来一直困于没