药物安全性评价-4.特殊毒理实验.pptVIP

药物安全性评价中的特殊毒性研究;特殊毒性研究; 第一章 生殖发育毒性;外缘化学物质对生殖发育的影响;第一节 生殖发育毒性的研究进展; 1.中药生殖毒性的古代记载; 2. 中药生殖毒性研究的必要性;妊娠中药的用药情况 ;3. 中药生殖发育毒性的研究现况;研究现况;4. 生殖发育毒性的安全评价;4. 生殖发育毒性的安全评价;第二节 生殖毒性概述; 生殖毒性试验常常采用分三段设计方案进行 I段：生育力与早期胚胎发育毒性试验，通常称为一般生殖毒性试验； II段：胚胎-胎仔发育毒性试验，通常称为致畸敏感期毒性试验； III段：围产期试验。 ;第三节 一般生殖毒性及其评价;一、试验目的;二、材料与方法;;第四节 致畸敏感期毒性试验;一、试验目的;二、材料与方法;二、材料与方法;检查图示;第五节 围产期毒性试验;1. 试验目的;2.材料和方法;;♂;第二章 遗传毒性研究;一.细菌回复突变试验(Ames试验);试验菌株：鼠伤寒沙门氏菌 我国采用1983年Maron和 Ames推荐的组合菌株TA100、TA98、TA97和TA102。 ;方 法：点式法、掺入法;S9：指经酶诱导剂处理后制备的肝匀浆，再经9000g离心分离所得上清液，加上适当的缓冲液和辅助因子。; 只要在一种受试菌株中得到阳性结果，即可判断受试物是致突变物； 仅当四种菌株都得到阴性结果，才认为受试物是非致突变物。 不加S9混合液得到阳性结果，说明受试物是直接致突变物； 加S9混合液才得到阳性结果，说明受试物是间接致突变物。;检出率高； 灵敏度较高； 经济适用； 由于在测试系统加入了S9，弥补了一般试管内试验的缺点。;Ames试验的缺点 微生物的遗传信息仅相当于哺乳动物的1/6，结构也较简单。 哺乳动物有较微生物完善复杂的DNA修复系统。遗传物质突变后较易修复，且微生物缺乏免疫功能。 对水溶性低物质可出现假阴性。 抑菌剂可抑制细菌生长。; 微核(Micronucleus)的产生与染色体损伤有关，是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损伤而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称微核。 ;在细胞质中微核来源： 断片或无着丝粒染色体在细胞分裂后期不能定向移动，而遗留在细胞质中； 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝粒的染色体环和断片在细胞分裂后期被留在细胞质中。;微核试验(Micronucleus test，MNT)是观察受试物能否产生微核的试验。 其主要可检出DNA断裂剂和非整倍体诱变剂。 ;微核判别： 为嗜染性与细胞核相似的圆形或椭圆形小体，一般小于间期核的1/3～1/5。 可存在于各种动、植物细胞中。;微核试验： 哺乳动物试验 体外试验：CHL、CHO、V79 蚕豆根尖试验 毛囊微核试验 鱼微核试验;NCE; (chromosome aberration analysis);哺乳动物;四、姐妹染色单体交换试验;原理;;(五)果蝇伴性隐性致死试验 (六)显性致死试验 (七)程序外DNA合成试验 (八)单细胞凝胶电泳试验;九、 观察方法的新进展;2. 微核自动化检测技术 流式细胞仪利用染色技术 图象分析系统;3. 荧光原位杂交技术 (fluorescence in situ hybridization, FISH) 它是原位杂交(in situ hybridization, ISH) 的一种。 ISH是一种在保持组织，细胞或染色体原有形态结构基础上，对其内部特殊核苷酸顺序进行检测及定位的分子生物学手段。; FISH是利用荧光探剂，将已标记或经特殊修饰的核酸探针与已固定的组织，细胞或染色体中DNA、RNA杂??，继而通过分析标记探针在被检对象中的显示状况而达到对特殊目标顺序进行检测、定位的目的。;它无论在体细胞或生殖细胞,分裂细胞或间期细胞，都能检出染色体断裂剂，非整倍体诱发剂，并可检出染色体精细结构改变。 对于环境中遗传毒性物质的检测，遗传病诊断，癌症早期诊断具有积极的意义。;（一）阴性和阳性对照的设立 阴性对照：空白对照，或者是溶剂对照。 阳性对照：已知能产生阳性反应的物质作对照。; 哺乳动物细胞介导 S9 纯化酶和基因工程;（三）致突变试验与致癌试验的关系 ;（四）试验结果在毒理学安全性评价中的作用;阴性结果判定条件： （1）最高剂量应包括受试物溶解度许可或灌胃量许可的最大剂量。 （2）各剂量组的组间差距不应过大，以防漏检仅在非常狭窄范围内才有突变能力的某些化学毒物。;阳性结果应具有剂量—反应关系，即随剂量增加，致突变作用增加；和在一组或多组的观察值与阴性对照比较有显