高产高质的KingFisher Flex 96孔深孔板工艺流程..pdfVIP

高产高质的KingFisher Flex 96孔深孔板工艺流程 SPA Application laboratory, Thermo Fisher Scientific, Vantaa, Finland 翻译：公杰 赛默飞世尔科技KingFisher Flex磁珠处理设备是一台在96孔板中完成如蛋 白、核酸等样品制备的自动化纯化仪。为进一步强化KingFisher Flex处理样品的 能力，我们开发并优化了适用于KingFisher Flex的深孔板。以下将介绍关于磁珠 回收效率，以及用Thermo Scientific 96深孔板进行RNA纯化的相关分析。 简介： KingFisher Flex应用一项先进的专利技术，通过转移磁珠的方法更有效、更 具重复性的从各种各样的原始样品中纯化蛋白质、核酸以及细胞等。目的分子经 过结合、清洗直至最后的洗脱等自动化流程，最后从磁珠洗脱下来的纯化样品用 于其他多种类型的后续分析。KingFisher Flex 的96孔布局兼容PCR板的整板提 取，同时，KingFisher 96孔板和96孔深孔板可以满足20-1000μl样品的处理。 为加强KingFisher Flex处理样品的能力，我们开发了96 孔深孔板，称之为96 DW Plate。在本文的应用中，我们以Total RNA纯化为例，详细阐述了96 DW Plate 在KingFisher Flex应用中的优点，以及96 DW Plate在磁珠回收率上显而易见的 优越性。该数据在KingFisher Flex的早期机型--KingFisher 96上得到验证。 96 DW Plate与特制的96 DW磁头套、96 DW 磁头以及96 DW加热块配套 使用。所有液体体积以及磁头运动都针对96 DW Plate以及板底高度进行优化。 如果使用其他型号的96孔板，可能因孔容积和板底高度的偏差而导致意外的液 体溢出。如果在纯化过程中需要加热操作，则加热块会抬升至板底部对板内样品 进行加热。而96 DW Plate板型与加热块匹配嵌合的独特设计也保证加热的最大 效率。如果用其他板型，热块会抬升板底高度，从而影响混匀操作甚至造成仪器 不稳定性（图1）。 图1 96 DW Plate（1.a）以及其他96孔板（1.b,c,d）的切面图和 KingFisher Flex 96 DW热块。 材料和方法： 磁珠回收效率 分别用96 DW Plate和其他厂家96孔板进行磁珠回收效率检验。四个深孔板 用 1ml 0.02% 的 Tween20 填 充 。 然 后 在 第 一 块 板 的 指 定 孔 内 加 入 30 μ l Dynabeads M-280 Streptavidin (10 mg/ ml, Invitrogen)。设置对照样品后执行 KingFisher纯化程序。程序运行经过磁珠混匀、收集，并由一块板转移至另一块 板，直至最后吸除丢弃。测试样品从处理过磁珠的孔内收集。孔内残留磁珠用 Beckman Coulter Z2粒子计数器计数。磁珠残留率用每孔的磁珠残留量占对照 样品的比例计算。不同板的磁珠残留率详见图2 图2 磁珠回收率用Beckman Coulter Z2 粒子计数器计算。96 DW Plate 磁珠回收率高达99.4%。 总RNA提取： 总RNA用KingFisher 96和Qiagen RNA提取试剂盒MagAttract RNA Cell Mini48 Kit 从HEp-2 培养细胞中提取。分别用96 DW Plate和其他两个公司的96 孔板对15个平行样品，约1╳106个细胞/孔提取。提取的样品洗脱至KingFisher 96 孔板，其他孵育、清洗过程在96深孔板中进行。纯化的RNA样