分子诊断之PCR分解.ppt

生物技术教研室：郑 鸣; PCR诊断主要通过引物介导特异性扩增目的基因以检测内源性或外源性目的基因的存在与否，进而对疾病的预防、诊断、和治疗提供信息和决策依据。;相关实验开展;二 PCR技术基本知识回顾;;;;;;Kary B. Mullis;;;;引物;94℃变性;;Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus);72℃;;;;;;;;;;;;;目前有两种 Taq DNA聚合酶供应 天然酶：从栖热水生杆菌中提纯 基因工程酶：大肠菌合成 一个典型的 PCR反应约需酶量 2.5U（指总反应体积为100 ul时） 浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少;dNTPs（dATP,dGTP,dCTP,dTTP） ;Mg2+是DNA聚合酶的激活剂。 0.5mmol/L-2.5mmol/L反应体系。 Mg2+浓度过低会使Taq酶活性丧失、PCR产量下降； Mg2+过高影响反应特异性。 Mg2+可与负离子结合，所以反应体系中dNTP、EDTA等的浓度影响反应中游离的Mg2+浓度。;;;;;引物（primer）;引物（primer）;引物3’端的序列要??5’端重要 引物3’端的碱基一般不用A（3’端碱基序列最好是G、C、CG、GC），因为A在错误引发位点的引发效率相对比较高。另外引物间3’端的互补、二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败。5’端