Cu（Ⅱ）对纤维蛋白原硝化影响的研究.pdfVIP

囫 doi：10．3969／j．issn．1672—5425．2014．10．005 2014，VoI．31 No．10亿 与 生 物 Z程 Chemistry Bioengineering Cu(Ⅱ)对纤维蛋白原硝化影响的研究 史建龙 ，罗云敬 。崔 爽 ，叶三仙 。鲁 绯。 (1．北京工业大学生命科学与生物工程学院，北京 100124； 2．北京市食品与酿酒产业产品质量监督检验一站，北京 100075) 摘 要：选取机体 Cu(iI)浓度，运用衰减全反射傅立叶变换红外光谱(ATR-FTIR)、SDS电泳和冯克劳斯 法，分析了Cu(I)对过氧亚硝酸根介导的硝化反应中纤维蛋白原二级结构和凝聚活性的影响。结果显示：随着 Cu(I) 浓度的增加，硝化纤维蛋白原中 110 kDa新增条带越来越清晰；二级结构中 螺旋比例下降， 折叠比例上升；凝聚活性 逐渐降低；当Cu(I)浓度为 1．66 mmo卜 L_1时，硝化纤维蛋白原中的 d一螺旋比例 由最初的 32．29 减少到 25．15 ， 折叠比例从 35．66 升高到 44．47 ；冯克劳斯法检测硝化纤维蛋白原失去凝聚能力，但 SDS电泳表明其依然可 以释放纤维蛋白单体。表明，Cu(I)能显著影响硝化反应中纤维蛋白原的二级结构，抑制其凝聚活性，促进硝化损伤。 关键词：过氧亚硝酸根 ；纤维蛋白原；红外光谱；冯克劳斯法；Cu(I) 中图分类号：O 611．62 Q 51 文献标识码 ：A 文章编号 ：1672-5425(2014)10-0020-04 纤维蛋白原是人体内具有调节凝血、炎症及组织 修复功能的大分子糖蛋白，由 3对非等同的多肽链 口。 y2形成六聚体[1 ]。纤维蛋白原的损伤能够增大 血液黏滞度和细胞内胆固醇的堆积、加速动脉粥样硬 化及其它心血管疾病的形成和发展[3 ]。纤维蛋白原 的氧化会导致其 6t链间酪氨酸发生交联[5]，金属离子 诱导的纤维蛋白原氧化修饰能诱发血纤维蛋白原异常 症，抑制血栓的形成【6 ]。 过氧亚硝酸根(ONO0一)是人体内一种强氧化硝 化细胞毒性物质，能够引发自由基链式反应[8]，对蛋白 质进行翻译后修饰，引起一系列生理病理过程，最终导 致癌症[g]、帕金森症、中风以及心血管疾病[1。。。研究 发现，一些 金属 离子 如 Co(Ⅱ)、Mn(Ⅱ)能够 催 化 ONOO一介导的纤维蛋白原硝化反应[1 ]。铜作为人 体必需的微量元素，参与多种金属酶的构成，催化心血 管基质胶原蛋白的合成，对于维持心血管功能及凝血 功能具有重要作用。 鉴于此，作者对 Cu(1I)参与的 ONOO一硝化损伤 纤维蛋白原过程进行研究，采用衰减全反射傅立叶变 换红外光谱(ATR-FTIR)、SDS电泳和冯克劳 斯(Von Clauss)法对该过程 中纤维蛋 白原二级结构以 及凝聚活性的变化进行了分析。 1 实验 1．1 试剂与仪器 纤维蛋 白原、凝 血酶，美 国 Sigma公 司；蛋 白 Marker(board)，北京鼎国；ONOO一溶液，根据 Uppu 等[” 提出的两相反应体系制备，一20℃保存备用，实 验前用紫外分光光度计在 302 nm处测定其吸光度， 并根据e 30z一1 670 L·mol-1·am-1计算 ONOO一浓 度；其它试剂均为分析纯；实验用水为二次去离子水。 U3010型紫外分光光度计，日本 日立公司；Ver- tex70型傅立叶变换红外光谱仪，德国Bruker公司；J— KEM 型平行合成仪，美国 Thermo Scientific公司； DYY-12C型电泳仪，北京六一仪器厂。 1．2 纤维蛋白原的硝化 将纤维蛋白原溶于 0．5 mol·L_。、pH值为 7．4 的 Tris—HC1(含 0．15 mol·L NaC1)缓冲溶液中。 在比色管中分别加入 3 mL浓度为 3 mg·mLI1的纤 维蛋白原溶液，然后加入不同量浓度为 100 mmo[· 基金项目：国家自然科 学基金 资助项 目，北京市 自然科 学基金资助项 目(2102005)，北京市教委科技 面上项 目 (KM201210005032) 收稿 日期 ：2014 06—17 作者简介：史建龙(1988一)．男，河北张家口人．硕士研 究生，研究方向：生物化学，E-mail：shijianlong@emails．bjut．edu．cn；通讯作 者：罗云敬，教授，E-mail：luoyj@bjut．edu．an。 史建龙等：Cu(Ⅱ)对纤维蛋白原硝化影响的研究／2014年懿 10期 L-1的 CuSO 溶液，使体系中 Cu(Ⅱ)的终浓度(mmol · L )分别为 0．00、0．17、0．30、0．50、0．67、0．83和 1．66，37℃孵育