慢病毒论文：人膜联蛋白A10基因过表达慢病毒的构建及其对人肝癌细胞株HepG2体外效应.docVIP

慢病毒论文：人膜联蛋白A10基因过表达慢病毒的构建及其对人肝癌细胞株HepG2体外效应的研究 【中文摘要】1、构建人膜联蛋白A10基因(annexinA10, human, ANXA10)和增强绿色荧光蛋白(Enhance green fluorescence protein,EGFP)融合基因的重组慢病毒；2、通过检测重组慢病毒对人肝癌细胞株HepG2凋亡、增殖的影响及其对HepG2细胞中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的影响。初步阐明膜联蛋白A10基因在人肝癌增殖、凋亡及转移中的作用。方法：1、针对已经筛选确定的ANXA10基因并将基因克隆转入到慢病毒载体表达质粒PGC-Fu中,通过酶切、测序验证ANXA10基因后,将PGC-Fu-ANXA10质粒和包装质粒pHdper1.0、pHelper2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带ANXA10基因和GFP基因的重组慢病毒PGC-Fu-ANXA10。2、体外实验中,将上述慢病毒以最适MOI转染人肝癌细胞株HepG2,分成ANXA10-慢病毒组、慢病毒空载组和HepG2细胞未转染组。荧光显微镜观察GFP表达以确定转染效率,采用RT-PCR在mRNA水平检测A