南京大学 分子生物学 课件 第23讲.ppt

3，酵母接合型相关匣子 （1）序列组成（表9-1） （2）沉寂匣子的阻遏蛋白及其结合位点 （3）沉寂匣子不活跃转录的原因;（二）哺乳动物免疫球蛋白的表达与基因重排 1，轻链 （1）种类 （2）结构 （3）基因及基因重排;A，轻链的V，C，J（如Vκ，Cκ，Jκ）基因在不产生抗体的细胞中相距很远，在产生抗体的细胞中被排列组合重排在一起，V和C之间是较短的J片段。轻链V区是由V基因片段和J基因片段共同编码的;B， ?链的形成 C， ?链的形成 2，重链 （1）种类 （2）结构 （3）基因及基因重排;3，免疫球蛋白类型的转换 （1）抗体类型的转换现象 （2）抗体类型的转换的机制;二、染色体水平上的基因活化调节 （一）染色质的状态 1，非活性染色质的结构 2，活性染色质的结构;（二）开放染色质结构的形成 1，DNA结构的影响 2，组蛋白的修饰 （1）H1组蛋白的磷酸化;（2）核心组蛋白的修饰 A，核心组蛋白的乙酰基化 B，H2A组蛋白的泛素化 （3）其他DNA结合蛋白的作用 A，启动子上游调控因子 B，HMG结构域蛋白;（三）活性染色质的特征 1，DNA酶I敏感位点 （1）活跃基因的DNA酶I优先敏感性 （2）活跃基因DNA酶I优先敏感性区域的分布 （3）造成DNA酶I优先敏感性的原因 （4）DNA酶I优先敏感性与基因转录的时间关系 ;2， DNA酶I超敏感位点 （1）DNA酶I超敏感点及其定位方法 （2）超敏感点与基因活性的关系 （3）超敏感点与基因转录的时间关系;（4）超敏感点的特点 不是特定的碱基位置，而是一段100~200bp的DNA序列 至少一部分序列以游离DNA形式存在 可能有局部的解链 与其下游转录起始位点距离因基因而异; ;（四）DNA的甲基化和去甲基化 1，真核生物基因组DNA甲基化 （1）真核生物DNA甲基化位点 真核生物DNA的mCpG是DNA甲基化的唯一形式 一般哺乳动物基因组5%的胞嘧啶甲基为mCpG，且在DNA双链对称出现， mCpG占全部CpG的70%;（2）基因的甲基化状态 高度甲基化（如：女性的一条X染色体） 诱导的去甲基化（如：组织或发育阶段特异性表达基因） 持续低水平甲基化（如：持家基因）;;（4）用于甲基化研究的限制性内切酶（图9－8） HpaⅡ：识别并切割未甲基化的CCGG MspⅠ：识别并切割所有的CCGG;2，甲基化DNA的结合蛋白 （1）MeCP1：在体外结合至少12对mCpG，是参与甲基化对基因转录抑制的主要蛋白 （2）MeCP2：结合一个mCpG碱基对，生物学意义不详;3，DNA甲基化的转录抑制 （1）哺乳动物以CpG甲基化程度为标准的启动子分类;A，CpG岛启动子 在某些持家基因的启动子附近CG高度集中（较其他区域高10~20倍），形成长达0.5~3kb的富含CG区域，称为CpG岛。 CpG一般不能和MeCP1结合;B，组织特异性启动子 CpG相对较少，在大部分组织中为甲基化状态，受DNA甲基转移酶调节;（2） DNA甲基化与基因表达活性的负相关性 A，限制酶研究结果：活跃基因表现为甲基化不足 B，用5-氮胞苷人为造成去甲基化可诱导基因表达;C，在特异性表达某些基因的组织中，活化基因附近mCpG降低至其他组织中的30% D，有H1的压缩状态核小体中含有哺乳动物和DNA中80%的mCpG;4，DNA去甲基化位点的特点 （1）范围和DNA酶I优先敏感区域十分吻合 （2）只有一小部分CG二核苷酸对的去甲基化与基因激活有关，它们位于对基因表达关系十分密切的序列中;5， DNA甲基化位点的维持及去甲基化位点的产生 DNA甲基化酶可以识别半甲基化的CG二核苷酸对并使之完全甲基化 去甲基化可以由去甲基化酶催化产生，或是在DNA复制时甲基化酶未能在半甲基化处催化甲基化;6， DNA甲基化/去甲基化对基因活性调控的相对性 （1） DNA甲基化程度因物种而异 DNA甲基化随进化程度的提高而增强;（2） DNA甲基化/去甲基化对不同基因活性有不同影响 例子：非洲爪蟾rDNA的活性不受DNA甲基化/去甲基化的影响，而其他基因不同 原因：可能与转录所用的RNA聚合酶种类有关;第四节转录水平的调控;一、Britten-Davidson模型 （一）保证各种细胞类型表达“正确”的基因组合的方法 1，多拷贝基因的组织特异性调控 不同类型的细胞通过与细胞类型特异的方式控制多拷贝基因的表达;2，单拷贝基因的复合控制系统 （二）真核生物基因表达的复合控制系统 1，真核生物基因表达调控的基本要素（图9-9） （1）结构基因 ;（2）接受位点 位于结构基因的5‘端，可被激活因子（蛋白质或RNA）识别 一个结构基因可以有不同的接受位点 含有相同接受位点的基因属于一组（set）基因;（3）综合者基因 编