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HIV抗体ELISA实验的操作规划
HIV抗体ELISA实验操作规程
HIV(1/2)抗体检测ELISA双抗原夹心法（丽珠试剂）
1. 目的：初步筛查HIV感染。 2. 原理： 用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗原（合成肽或基因重组蛋白）包被微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其他试剂组成，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中的HIV-1/HIV-2抗体。 3. 材料：HIV(1/2)抗体诊断试剂盒（珠海丽珠，国药准字、注射器、试管、离心机、加样器、吸嘴。
4. 操作步骤： 4.1? 抽取患者静脉血2ml，注入试管中。 4.2? 2500rpm/min离心10分钟，分离血清。 4.3? 将试剂盒平衡至室温，取出所需的条板，余下的即时封存。 4.4? 将所需数量的条板固定于支架，按顺序编号，设置样品孔、空白对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔（空白对照1孔、阳性对照2孔、阴性对照3孔）用40-200ul规格的加样器在样品孔中加入50μl 待测样品，空白孔不加任何???体，阴性、阳性对照孔分别加入50μl阴性或阳性对照，轻拍混匀。 4.5? 置37℃湿盒温育30分钟。 4.6? 将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6次，扣干。（注：洗涤时各孔要加满洗液，每次有1分钟的浸泡时间。） 4.7? 每孔加入50ul 酶标记物(空白孔除外)，轻拍混匀。 4.8? 置37℃湿盒温育30分钟。 4.9? 将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6次，扣干。（注：洗涤时各孔要加满洗液，每次有1分钟的浸泡时间。） 4.10 每孔加入50ul 底物缓冲液和50ul 底物液, 轻拍混匀置37℃湿盒温育30分钟。 4.11 每孔加入50ul 终止液，轻拍混匀。 4.12 用酶标仪单波长450 nm 或双波长450/630nm测定各孔A值。 5. 结果判断 5.1? 临界值(Cutoff)=0.15+阴性对照平均A值。 5.2? 阳性：样品的A值≥Cutoff值。 5.3? 阴性：样品的A值＜Cutoff值。 6. 注意事项 6.1? 正常时，阴性对照的A值应0.12，阳性对照的A值应≥0.8，阴性对照的A值若0.08以0.08计算。 6.2? 若阳性对照A值孔间之差大于30% ，应重复试验。 6.3? 做好个人防护，患者标本须消毒处理。 7. 临床意义 HIV(1/2)抗体诊断试剂盒适合批量检测的需要。
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