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2010版中国药典菌种传代与特定菌检测经典问题及
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1.以第五代菌做阳性对照,实验过程中的接种按药典应该也算传代,那是否算是第六代菌
呢?
答:依然算第五代(接种的菌株算第 5 代,培养后算第 6 代)
2.其实验结果是算哪一代菌的?
答:见上题
3.现在有无对照菌种可以购买?联络电话?
答:省药检所业务科销售药典规定的标准菌株,为第二代甘油冻存管,电话:020
4.菌种发放单应包括什么信息?
答:根据自己工作的需要,大致包括:菌种名称,编号,来源,接收日期,接收人等。
5.如何检查黑曲霉孢子悬浮液孢子含量为 50~100 个/ml。铜绿假单胞菌单菌如果用甘油冷
冻管,也是低温,是否也会影响它的活性?应如何保存?
答:可用玫瑰红钠琼脂培养基或改良马丁琼脂来确定黑曲霉孢子悬浮液。铜绿假单胞菌应使
用最终甘油浓度为 20%的甘油冻存管保存,保存在-30℃或更低温度,则可保持其活性。若
是斜面或营养肉汤,建议室温保存。
6.工作菌株,25℃下可连续使用一周,这里的工作菌株是指原液还是制备好的菌悬液。为何
工作菌株不低温存放,而是 25℃?
答:首先要说明,所有的操作应按药典要求来操作,这里的工作菌株指原液,工作菌株建议
在 2-8℃保存,但要注意的是,铜绿假单胞菌的工作菌液不能低温保存,低温会损伤其活性。
由于笔误,写成了 25℃,请更正为 2-8℃。
7.简单方便的厌氧培养方案?
答:硫乙醇酸盐培养基;固体培养基的话可考虑使用一次性厌氧袋。
8.甘油冻存管一定要-30℃吗?0℃以下不可以吗?
答:详见《中国药品检验标准操作规范》2010 版 341 页。我们的甘油冻存管保存在-30℃。
9.第一代菌种可不可以作为工作菌株使用?
答:我们不这样使用,因为担心菌株没有充分复壮,生化特性可能不典型。
10.制备菌悬液时,要使其在 10~100cfu 中,应多注意的地方是什么?
答:制定标准化操作规程,减少不同实验者带来的误差,接种量、培养温度和时间应每次一
致。
11.铜绿假单胞菌不宜放冰箱内保管,但其营养肉汤液能否放在冰箱保管?
答:详见《中国药品检验标准操作规范》2010 版 341 页。能否放冰箱可自行验证。
12.黑曲霉的存放期如何验证?
答:通过孢子悬液计数和菌落特征,进行验证。
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13.标准储备菌株必须进行纯度和特性确认?还是在必要情况下才做?
答:详见《中国药品检验标准操作规范》2010 版 341 页,我们在制备标准贮备菌液前进行
纯度和特性确认,最好在使用前再进行纯度和特性确认。
14.铜绿假单胞菌贮存温度应为多少度?
答:一般在 10℃以上,甘油冻存管至少在-30℃以下。
15.制备工作菌种进行菌种保藏中的保存期是否要进行验证?
答:可参考 2010 年版《中国药典》标准操作规程(SOP),应进行验证。
16.验证用菌株可否使用 ATCC?
答:如果按中国药典检验的,用 CMCC
17.菌种鉴定该如何做?
答:请参考讲义内容。
18.药典菌悬液制备是要菌种的新鲜培养物接种至培养基中,培养 18-24h 再进行稀释,制备
菌悬液,可否直接使用未过期工作菌种进行稀释来制备菌悬液?
答:按药典要求不行,如要使用,请自己验证。。
19.斜面低温保藏法:每一次的菌种传代都需要做菌种纯度鉴定吗?
答:建议制备斜面保存管前进行菌种纯度鉴定,以后的每次传代视具体情况而定。
20.如何比较快速有效判断菌液的浓度?除了可以用“比浊仪”参考,还有什么方法?
答:比浊仪只做辅助参考,还需
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