分子生物学与的临床.ppt

分子生物学与临床 天津市第三中心医院 刘树业; 随着分子生物学技术的发展，聚合酶链反应（PCR）技术已逐渐应用于遗传性疾病、肿瘤及感染性疾病等方面的诊断。 1 . 检测临床标本中病原体核酸序列。 2 . 肿瘤基因突变情况。 3 . 遗传性疾病的基因序列。 4 . 人类白细胞表面抗原（HLA）配型。 5 . 法医学方面的鉴定工作。;;4. 对于体液免疫力低下或使用免疫抑制剂而无抗体产生者，PCR却可以作出明确诊断。 5. 可以对病原体作定量分析，反映病原体在机体的复制及动力学变化情况。 6. 可对病原体进行基因分型。指导临床治疗。 ;;几点认识;五.禁用产物的电泳分析技术。 六.探针杂交技术和防污染技术的采用是一大 进步。;;;;;;;二.外源性物质;;;;;四种衣原体的性状比较;;;;;;;;;;;;;;;;;;基因诊断是指检测感染者体内病毒核酸的有无,或含量多少来进行病原学诊断的一类方法。 病毒性肝炎基因诊断包括病毒基因种类及含量、基因分型、亚型和变异及准种等的诊断。 甲型肝炎和戊型肝炎无慢性化,且有较好的血清学诊断指标,故一般不需进行基因诊断。 HGV和TTV;定性和定量PCR：定性检测主要是用于未知感染者的诊断,确定患者是否感染了肝炎病毒,结果分别报告为阳性或阴性。 定量测定：己知感染者的抗病毒治疗时动态观察疗效,结果报告需以量来表示。如高出定量范围上限，则需对标本稀释后再测,低于定量范围下限时,则报告小于××copies/ml,不能以阴性形式报告。;肝炎病毒;甲型肝炎病毒（hepatitis A virus，HAV）;HAV的生物学性状;HAV的电镜照片;HAV的结构;HAV的致病性;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;HAV的免疫性;Time course of HAV infection;HAV的其他生物学特性;常见症状;微生物学检查;乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）;;;;;;;a：变性，双链模板裂解成两条单链;b：退火，引物、荧光探针分别结合到单链模板的相应位点，探针①3’端激发基团和探针②5’端的发光基团紧靠在一起，发出640nm的荧光;c：延伸，随聚合反应的进行，结合在模板上的2条荧光探针被替换下来。;d：一个循环结束，生成2条双链模板;? ? ;;电镜下的HBV;Dane 颗粒;HBV的小球形颗粒;HBV的管形颗粒;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.; HBV的复制;HBV的抗原组成;表面抗原HBsAg;核心抗原HBcAg;e抗原HBeAg;HBV的其它生物学性状;HBV的致病机制;HBV的传染机制;乙型肝炎的特点;乙肝五项及HBV DNA的临床意义 ;乙型肝炎病毒抗原,特别是表面抗原,在血液中的浓度较高,现症HBV感染——明确诊断。 仅抗HBc单项阳性,也可在血清中检测到 HBV DNA 乙型肝炎的诊断往往不需要进行病毒核酸的检测。 抗病毒治疗时,血清中的病毒核酸含量是反映病毒数量和复制活跃程度最可靠的直接指标、动态观察药物疗效的确切指标,特别是对于HBeAg阴性患者。;预防及免疫;丙型肝炎病毒（hepatitis C virus）;;;;;;;;;;HCV的生物学性状;HCV的致病性与免疫性;丙型肝炎的特点;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;HCV的诊断及预防;HCV的诊断及预防;ＨＣＶ抗原表位：线性表位、空间表位。如果以ＨＣＶ特异性抗体对化学合成的随机噬菌体多肽库进行筛 选,则很难筛选到与原始的抗原序列完全一致的序列,而是获得大量与原始抗原序列完全不同的多肽片段。这种一级结构序列与原始抗原不同,又保留其抗原反应性的抗原表位,称为模拟表位(ｍｉｍｏｔｏｐｅ)。从其结构而言,模拟表位多数是构象表位(ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｅｐｉｔｏｐｅ),即空间表位。 噬菌体表面展示技术的建立和应用促进了ＨＣＶ抗原模拟表位的研究。国外学者应用噬菌体表面展示技术筛选获得了ＨＣＶ不同的结构和非结构蛋白抗原的模拟表位。这些研究结果首先在免疫学理论上阐明了抗原 抗体分子之间