禽大肠杆菌血的清型 PPT李赫主要.pptVIP

禽大肠杆菌的分离培养和血清型鉴定 ;内容提要;前言(替换）;实验路线;实验路线;实验路线;实验路线;O抗原的制备 将保存好的菌种接种于SS琼脂培养基上，均匀涂布，37℃温箱培养24小时后取出。用适量生理盐水洗下菌苔，移入含无菌玻璃珠的三角烧瓶中，充分振摇使菌体均匀分布，置100℃水浴2-2.5h，把菌悬液移入离心管，以离心，弃去上清液。将制得的菌体再用无菌生理盐水洗涤，以4000rpm离心10分钟，弃去上清液。取获得的一定量的菌体经无活菌检测合格后用生理盐水稀释成含细菌10亿个/ml的菌悬液，加0.5%石炭酸，置4℃的冰箱中保存备用 。;血清型鉴定 1、试管凝集鉴定前验证试验 取7支凝集用试管分别按1:2、1:4、1:8、1:20、1:40制备，余下试管用为对照组，如阴性对照、抗原自凝对照等，试验完成后将凝集试管放在37度恒温箱中放置24-48小时后取出，在灯光下观察结果，??终确定血清稀释4倍的血清与抗原发生凝集效果明显。;血清型鉴定 2、未知血清型试管凝集试验 以大鸡为例：将15种大肠杆菌血清准备好，在超净工作台操作，准备17支凝集用试管，做好标记，其中15支试管中血清分别稀释4倍并分装在15支试管中，剩下两试管分辨做阴性对照与阳性对照试验。试验完成后将凝集试管放在37度恒温箱中放置24-48小时后取出，室温下放置1-2h在灯光下观察结果。卵黄中提取的大肠杆菌均按以上方法检测。以下为观察结果图片。;1、该实验在卵黄中分离出大肠杆菌，其感染途径可能为垂直感染。说明该仔鸡有可能在胚胎时期就已经感染大肠杆菌。也有可能是种鸡感染大肠杆菌病，经垂直传播感染鸡仔，导致鸡仔发病。 2、实验时，待检未知血清型大肠杆菌菌液浓度需达到100亿个/ml，如果菌液浓度不到则很有可能出现试管凝集贷现象，使结果不明显，检测不准确。 3、在试管凝集试验中，要尽量准备多的血清种类，这样能提高检测的广度，避免血清种类不够，无法获得检测结果。 ;结论; 敬请各位老师批评指正！ 谢谢