基于介孔碳的电化学酪氨酸酶生物传感器测定水体中的苯酚及高效液相色谱法.pptxVIP

本实验主要是采用新型的介孔碳材料作为固载酪氨酸酶的检测平台构建生物传感器，应用于水体环境中苯酚污染物的检测，并通过高效液相色谱法对电化学酪氨酸酶生物传感器法的准确性进行了评价。研究表明，介孔碳的“空间限制效应”能够防止酪氨酸酶（三维尺寸为6. 5 nm x 9. 8 nm x 5. 5 nm)体外去折叠失活。基于介孔碳材料构建的电化学酪氨酸酶生物传感器在苯酚污染物检测方面显示了优良的性能，其重现性、灵敏度、稳定性、选择性以及检出限均比较令人满意。基于介孔碳的电化学酪氨酸酶生物传感器对苯酚污染物的检出限达到20 nmol/L，线性范围0.1-10mol/L。采用基于介孔碳的电化学酪氨酸酶生物传感器和高效液相色谱法对实际水产品进行测定结果比对，结果表明该生物传感器方法检测结果准确、有效，适合于苯酚污染物突发污染事件的应急检测。;苯酚是一种常见的工业污染物，主要来源于炼焦、炼油、造纸等生产过程中排出的废气和废水。苯酚可经呼吸道、消化道和皮肤侵人人体，与细胞原生质中的蛋白质结合，使细胞失去活力。苯酚还对神经、泌尿、消化系统有毒害作用。苯酚是环境中广泛存在的一类优先控制有机污染物，不仅具有毒性，还具有内分泌干扰效应。苯酚污染物严重威胁饮用水安全和人类健康，对苯酚污染物进行检测是饮用水安全评价的一项重要指标。我国生活饮用水卫生标准(GB 5749-2006)规定饮用水中挥发性酚类似苯酚计)不能超过 0. 002 mg/L。存在于饮用水环境中的这些苯酚污染物严重威胁着生态安全和人类健康。所以需要发展高灵敏度、高选择性的检测方法，从而能够及时筛查出环境中的苯酚污染物并及时采取补救措施。目前常用高效液相色谱(HPLC）等方法对苯酚污染物进行定量检测。此类分析方法的准确度较高，但是操作复杂、耗时并且仪器设备笨重、分析成本高，不适于大量环境样品的快速筛查。因此急需发展灵敏、经济、便捷的能够筛查水体环境中的苯酚污染物的新方法。; 酪氨酸酶（三维尺寸为6.5 nm x9. 8 nm x5.5nm)生物传感器是催化氧化苯酚的核心部件，同时酪氨酸酶也是一种生物活性蛋白质(体外易失活) 。酪氨酸酶易失活的特性决定了必须要有一个对酪氨酸酶分子生物相容性较好的固定材料来提供一个有利的微环境，以保持其生物活性和稳定性，同时要求这个固定基底具有较好的电化学换能力（导电性)和高的酶载量以提高生物传感器的灵敏度和检出限。因此，电化学酶基生物传感器发展的核心是传感材料，性能优良的固定材料能够显著提高酶的体外稳定性和生物活性。电化学酪氨酸酶生物传感器是一种非常有应用前景的苯酚污染物检测方法。; 其对苯酚的检测原理是:电化学酪氨酸酶生物传感器能够利用分子氧催化苯酚生成邻苯酚和邻苯醌，而邻苯醌又可以在电极表面通过电化学催化还原生成邻苯酚形成信号循环放大。有序介孔碳具有可控的孔结构和孔径大小。大的比表面积和孔体积、良好的导电性、好的电化学稳定性，可以作为酪氨酸酶的理想固定基底。;1.1材料与试剂 壳寡糖和酪氨酸酶(酶活力大于1 000 μ/mg,等电点5. 92)都购自美国西格玛公司，甲醇(色谱纯)购自德国默克公司，苯酚和其他所有试剂都购自天津科密欧公司。整个实验过程中采用的水均为Milli-Q水(电阻率18 MΩ?cm）。如果没有特殊说明，电化学实验过程中的电解质溶液均采用50 mmol/L的磷酸盐缓冲液争（PH 7. 0)。;1.3 10 nm孔径介孔碳材料的制备 本研究以采用溶胶-凝胶法制备的直径为10nm的单分散硅球作为硬模板，然后以苯乙烯为碳源，经惰性气氛下的高温催化碳化一去除模板等步骤后，获得10 nm孔径的有序介孔碳。;麂皮是一种野生动物麂的皮，粒面伤残较多，比羊皮厚实，纤维组织也较紧密，是加工绒面革的上等皮料。麂皮现己很少用，现多用优质山羊皮，绵羊皮，鹿皮代替，经油鞣法制成的清洁用革，质地相当柔软,对于硬度不高的玻璃或者是其他东西相当有保护性.而这种麂皮又分为生麂皮和熟麂皮,生麂皮一般用来擦拭汽车中的玻璃或者是反光镜的。;电化学酪氨酸酶生物传感器采用恒电位方法进行苯酚检测腔制电位为-0. 1 V，基底溶液为 8 mL50 mmol/L磷酸盐缓冲溶液)。 高效液相色谱法测定条件:Diamonsil C18（Diamonsil C18是北京迪马科技有限公司色谱柱品牌。）、色谱柱(250 mm x 4. 6 mm , 5 μ m)为分析柱;流动相为甲醇-水(4:1, v/v)，流速 1 mL/min;检测波长为272 nm;柱温为30℃;进样量为10 μ L。 电化学酪氨酸酶生物传感器检测结果准确性（A）的评价公式:A = (CH-CE )/CH x 100%，其中CH代表高效液相色谱法检测的浓度值;CE代表电化学