2014生化4-2新.ppt

; 4.8 不可逆抑制作用 （irreversible inhibition） 定义：抑制剂与酶的活性中心的功能基团共价结合而抑制酶的活性,不能用透析或超滤等物理方法除去抑制剂而恢复酶活性。 研究酶的作用机制时常用来鉴定活性部位的氨基酸残基。 ;不可逆抑制作用（irreversible inhibition） ;一些重要的抑制剂及其实际意义 ; 这些有机磷化合物能抑制某些蛋白酶及酯酶的活力，特别是强烈抑制胆碱酯酶。 ;不可逆抑制（irreversible inhibition);非专一性不可逆抑制;专一性不可逆抑制;用自杀性底物对付抗青霉素的菌株; 青霉素通过抑制细菌细胞壁四肽侧链和五肽交连桥的结合而阻碍细胞壁合成而发挥杀菌作用。;革兰阳性细菌细胞壁含四肽侧链和五肽交连桥;对青霉素耐药有以下两种生化表现： （1）.产β-内酰胺酶。葡萄球菌与青霉素多次接触后，可以产生β-内酰胺酶水解青霉素，从而表现出耐药性。这是葡萄球菌对青霉素耐药最常见，也是最重要的一种途径。 （2）.PBPs性质的改变。PBPs（青霉素结合蛋白）是青霉素的作用靶位。葡萄球菌可以改变PBPs的性质，从而大大降低其与青霉素的亲和力，从而表现出耐药性，;对青霉素酶具有抑制作用的青霉素产品;cefoxitin，先锋霉素(或称为头抱菌素）类抗生素，其结构为:; 以酶作为药物的靶标历史最悠久，现今仍是重要的研究对象。临床应用的许多药物是通过特异性地抑制酶的活性起作用的。这些靶酶包括人体内固有的酶和侵入到人体的病原体的酶系。;酶抑制剂的发展与分类; 2. 抗肿瘤的酶抑制剂类药物 大多数酶抑制剂都是抗增殖药，利用肿瘤细胞生长和分裂比正常细胞更快的事实，选择性地抑制肿瘤细胞的复制。;;酶抑制剂的设计原理; 传统的酶抑制剂在结构上与底物或反应中间体甚至产物相似。组合化学和快速筛选技术发现的大量酶抑制剂与底物或产物结构差异很大，但与靶酶选择性结合。 根据酶抑制剂与靶酶活性位点的作用力，可将酶抑制剂分为非共价结合的酶抑制剂和共价结合的酶抑制剂。; 1. 基于非共价键结合的酶抑制剂的合理设计 非共价键结合的酶抑制剂对其活性位点的亲和力和特异性取决于静电力、色散力、疏水作用以及氢键的相互作用。 所有酶催化的反应都经历从基态经过过渡态最后形成产物的过程，在此过程中，常常伴随高能量的中间体的形成。 非共价键结合的酶抑制剂根据其作用机制，可分为基态类似物抑制剂、多底物类似物抑制剂和过渡态类似物抑制剂三类。; 2. 基于共价结合的酶抑制剂的合理设计 共价结合酶的抑制剂通常也是底物或产物的结构类似物。首先快速可逆地与酶活性位点非共价结合；一旦形成酶-抑制剂复合物，就通过各种机制与活性位点的化学活性基团发生反应，在酶与抑制剂之间形成共价键。 共价结合酶的抑制剂可以分为三类：基于机理抑制剂、亲和标记抑制剂和伪不可逆抑制剂。; 基于机理的抑制剂具有以下特点： ①同正常底物的化学结构相似，这种相似包括电性和立体两个因素； ②在通常状态下，具有低反应性能的潜在基团或结构片段；在酶的催化阶段，经靶酶诱导激活，转化为反应性能强的活性基团或中间体； ③与酶的活性中心共价结合，是酶不可逆失活。高度特异性，毒性较低。; GABA氨基转移酶是一种依赖磷酸吡哆醛的酶，参与GABA脱氨基生成丁醛酸的过程，同时丙酮酸盐接受氨基生成L-丙氨酸。氨己烯酸就是基于机理的GABA转氨酶抑制剂，通过提高大脑中GABA的水平，发挥抗癫痫作用。; 亲和标记抑制剂通常也是底物或产物类似物，具有两个结构特征： ①分子中与酶可逆结合的部分，即识别基团； ②在识别集团上连接或修饰有反应活性的化学集团或原子，或称活性基团。 ; 设计一个有效的亲和标记抑制剂，首先要了解抑制剂与活性位点非共价结合的基本要求，即对识别集团的要求；然后确定引入活性基团的空间区域；如果附近没有亲和性氨基酸残基，可设计空间臂，在空间臂末端置入活性基团。 ; （3）伪不可逆抑制剂 伪不可逆抑制剂是介于可逆性抑制剂和不可逆抑制剂之间的一类抑制剂，它与靶酶作用虽以共价结合的方式形成复合物，似不可逆抑制剂，但是共价复合物有一定的半衰期，半衰期从数小时至数天不等，经水解或共价键逆转重新产生游离酶。;神经氨酸酶抑制剂;流感病毒外膜上的两种糖蛋白突起;; 2. 神经氨酸酶的结构