曲骨发育不全综合征示FGFR2在核糖体DNA转录中有细胞核活性.docxVIP

曲骨发育不全综合征揭示FGFR2在核糖体DNA转录过程中有胞核活性 成纤维细胞生长因子2（FGFR2）在骨发育期间促进骨祖细胞增殖和分化，而受体如何引出这些不同的细胞反应仍然不清楚。对FGFR2-骨骼障碍曲骨发育不全综合征（BBDS）的分析揭示出FGFR2除了其在细胞膜表面的经典信号活性外，还在细胞核内调控骨的形成。之前我们显示了一种独特的引起BBDS的FGFR2突变，这种突变减少了胞膜上的受体水平，并减少了其对胞外FGF2的反应性。在本研究中，我们发现这些突变不仅减少经典信号传递，还在核糖体DNA（rDNA）启动子上增强了FGFR2的细胞核占据。核FGFR2通过降低RUNX2的表达与FGF2和UBF1发生相互作用，从而激活rDNA的转录。BBDS中FGFR2核活性的增高使得发育阶段骨中核糖体RNA水平升高，从而促进了骨祖细胞的增殖并降低了其分化。将FGFR2识别为骨中一种rDNA的转录调控因子，这令人意外地显示了FGF信号传递中的一种细胞核路线，这一路线使得FGF能独立地调控骨祖细胞的增殖与分化。 INTRODUCTION 骨骼发育中的先天缺陷影响着很大一部分人，每3000个成活初生儿中就有1个受累（1）。这些骨骼疾病很多是源自确定骨的大小和形状的那些基因在胚胎发育期间发生了突变。成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）（MIM：176943）就是这类基因中的一个。那些增强了受体活性的FGFR2突变，在Apert，Crouzon，Jackson-Weiss以及Pfeiffer综合征中引起颅骨和肢体骨内骨骼融合（2）。与之相比，那些降低了受体活性的FGFR2突变在Larimo-auriculo-dento-digital（LADD）综合征中引起颅骨和肢体骨内骨发育不良（3）。小鼠中的基因研究显示Fgfr2突变通过改变受体对骨祖细胞的调控，干扰了骨骼发育：Fgfr2功能增强，细胞的增殖与分化就增强（4，5），而Fgfr2功能减弱，增殖与分化就减弱（6，7）。当Fgfr2基因突变既促进骨骼发育阶段时期骨祖细胞增殖，也促进分化时，受体引出这种相矛盾的细胞反应的机制尚不清楚。 有证据提示在FGFR2上游或下游起作用的那些FGF信号传递组分的搭配，并不是以要么促进细胞增殖，要么促进细胞分化这样一种单一的形式相连的。举例来说，不同的FGF配体比如FGF2和FGF18，同时促进骨祖细胞的增殖与分化（8，9）。相似的是，在骨祖细胞中，FGFR2介导不同下游信号传递级联反应比如MAPK或PLCγ的活化，这同时促进了增殖和分化（10~12）。FGFR2在骨祖细胞中的双重作用可以通过其在受体活化初始阶段时转录分布情况上的不同来解释。尽管如此，FGF信号引出原始转录反应的机制仍不清楚，这是因为该途径靶向的转录调控蛋白广泛表达，被多种信号传递途径利用（13）。但是有趣的是，FGF信号传递途径在细胞核中直接出现。FGF2通过不同的转录过程产生五种同工型蛋白，它们全都含有细胞核局限化信号（NLS）（14）。小分子量FGF2一开始被分泌，然后在胞吞作用下转入核中，而高分子量同工型仍然留在细胞内，在合成调控增殖后移入细胞核内（15）。FGF2的NLS据显示也通过输入蛋白β（importin-β）促进FGFR1进入细胞核（16）。核FGFR1-FGF2共同局限化以激活核小点，这与转录活化有关（17）；但是，核FGFR1-FGF2利用的直接基因靶点尚不清楚。 本研究中，我们对曲骨发育不全综合征（BBDS MIM614592）中独特的FGFR2突变进行了分析，显示出了核FGF信号途径的一个直接基因靶点，并且同时解决了FGFR2在骨中的双重功能（18）。BBDS与其它FGFR2病变不同，在颅面骨和四肢骨中表现出骨化缺失，但其有骨祖细胞的充分支持（18）。这一表型提示本病中专有的FGFR2错义突变分开了FGFR2对骨祖细胞增殖和分化的双重作用。BBDS中显性FGFR2突变，p.Met391Arg或p.Tyr381Asp，位于其跨膜区，选择性地减少了FGFR2在膜上的水平，从而降低了受体对胞外FGFs的反应（18）。BBDS表型的某些方面似乎是由经典FGF2信号传递降低所致，但仍然有很强的证据本病不是由FGFR2某样功能的精确丧失所致：BBDS中的骨骼缺失与LADD综合征中的这种缺失，或是在成骨性中胚层中条件性敲除Fgfr2的小鼠中的这种缺失不重叠（3，6）。这里，我们给出了有力的证据，即核FGFR2活性增强可以解释BBDS中骨骼缺失的病理生成过程。我们揭示了在骨祖细胞中核FGFR2在rDNA启动子处与FGF2和UBD相互作用，并限制了RUNX2造成的转录抑制，从而直接激活rDNA转录。此外，我们显示了BBDS中的FGFR2突变增强了核FGFR2活性，从而升高了rRNA水