泸州医学院的设计性实验汇报样式.docVIP

泸州医学院 本科学生设计性实验报告 专业 临床 年级 11 班级 12 组长姓名 曹钰 小组成员 邹灿灿、唐林红、马红敏、徐丹、金鑫 张毕海、宋惠玲、曹钰 、滕章佩 课程名称 医学遗传学 时 间 2013.6.9 实验名称21三体综合征产前诊断指导教师 余红总体设计思路在遗传学上先天愚型几乎全是新发生的，与父母的核型无关，而是由于配子形成过程中21号染色体不分离所致，统计资料表明，不分离绝大多数发生在患者母亲，并且母亲年龄越大（35岁以上），染色体不分离的几率越高，出生21三体患儿的可能性越大。由于张某已经31岁，而且其一表姐曾生育一智力低下的21三题综合征儿子。 所以张某到医院做唐氏筛查，结果血清中AFP、hCG、uE3检测结果为阳性。其中AFP阳性尤为重要，因为AFP阳性与胎儿畸形有很大关联，例如：胎儿神经管畸形，畸形时羊水内AFP含量明显升高，可达10倍；胎儿其他畸形如先天性肾痛、先天性食道闭锁、脑疝、脑积水、囊性水肿、骶尾畸形瘤、糖尿病孕妇胎盘功能不足等，羊水AFP值均会升高。故AFP阳性且结合以上叙述，张某所孕胎儿为21三体综合征的风险很高，故建议张某做产前诊断。根据诊断结果提出中肯的建议，为张某做生育指导。 实验设计方案： 具体设计方案：1．实验目的 1.掌握遗传病的产前诊断过程； 2.通过对21三体综合征的诊断设计，培养运用遗传学现代技术解决 医学实际问题的能力。 2．实验原理 方案一：羊膜穿刺法：羊水中有一定数量胎儿脱落细胞（多为成纤维细胞和上皮细胞）,经体外培养后,可进行染色体分析.酶和蛋白质检测性、染色体检查和提取DNA作基因分析，也可不经培养，用微量技术作酶和蛋白质分析或直接提取DNA作基因诊断。 方案二：孕妇外周血中胎儿细胞检测：胎儿有4类细胞会经过胎盘进入母体循环中。这4类细胞为滋养层细胞、有核红细胞、淋巴细胞和粒细胞。在1ml母血中大约每100万个有核细胞中存在1个胎儿细胞，其波动范围相当大。面对如此稀少的胎儿细胞,首要的是使用某种有效的方法从母体中分离富集这些细胞。其中最合适做产前诊断的胎儿细胞类型当首推胎儿有核红细胞：胎儿有核红细胞因具有独特的形态学特征，含有全部遗传信息，生命周期短及存在特异性抗原而成为无创性产前诊断的主要研究对象。胎儿有核红细胞在早孕时就在母体血中出现，随着妊娠的进展而有所变化。在不同阶段，在母体血中所能检出胎儿有核红细胞的量亦不同。孕17、18周左右为产前诊断的最佳时间。3．实验材料、试剂及器材 3.1 材料 离心管，离心机，天平，37℃温箱，载玻片，盖玻片，恒温水浴锅，光学显微镜，标本板，玻璃铅笔，定时钟，染色缸，滴管。 3.2 试剂 pH6.8 PBS缓冲液，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化钠100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。 3.3 主要仪器 离心管，离心机，天平，37℃温箱，载玻片，盖玻片，恒温水浴锅，光学显微镜，标本板，玻璃铅笔，定时钟，染色缸，直柄虹膜镊，滴管。  4．实验方法及注意事项 4.1 方法步骤 方案一： 1、对孕期合适孕妇，采用B超探查确定腹部穿刺点(羊水多且无胎儿肢体处)，或在B超监测下实施穿刺； 2、穿刺羊水前，可让孕妇卧床连续翻转五次体位，使子宫内羊水中的胎儿细胞悬浮起来，方便穿刺抽取更多的胎儿细胞； 3、使用穿刺包按无菌要求消毒穿刺点，铺洞巾，用穿刺针头穿刺，缓缓抽取10-20毫升羊水，沿管壁缓缓注入无菌离心管，用无菌封口封好； 4、常规离心，无菌条件下打开封口，弃上清液，留1毫升左右羊水混匀细胞沉淀物成细胞悬液用于基因测试或细胞培养； 5、将上述用于基因测试的细胞悬液1毫升装到准备好的1.5毫升无菌封口塑料离心瓶内;密封后连同孕妇的详细检测记录资料一起加上冰袋封好送往测试单位(或用特快专递邮寄)，测试单位收到后会留档并做基因测试(收费项目)； 6、用于细胞培养则将悬液均匀分配到准备好的培养瓶内，无菌封口后置二氧化碳培养箱培养；每隔几天用倒置显微镜观察生长情况，根据需要更换部分培养基；培养15-20天，当细胞铺满瓶壁时，可收获细胞进行染色体分析； 7、用显带技术进行染色体核型分析：（1）将制好的染色体标本，置72℃～75℃烤箱中烤片3h。