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水产品中抗生素残留测定,实验报告 液相色谱法测定水产品中的抗生素残留 液相色谱法测定水产品中的抗生素残留 随着我国养殖业的发展，越来越多的被应用于渔业生产中，这些药物的使用几乎贯穿养殖的全过程，由于养殖户不遵守休药期规定及未正确使用药物，造成在水产品中的高水平残留。人长期摄入含抗生素残留的水产品后，药物不断在体内蓄积，当浓度达到一定量后，就会对人体产生毒性作用，四环素类药物的毒性反应主要表现为对胃、肠、肝脏的损害及牙齿的染色等。还会造成过敏反应，二重感染，致畸胎作用。而氯霉素有严重的副作用，它能抑制人体骨髓造血功能而引起再生障碍性贫血和粒状白细胞缺乏症等疾病，对人类的健康构成潜在的危害。因此，水产品中抗生素残留量的检测技术，日益受到国内外学者的关注。本文研究了用全自动固相萃取(AUTOSPE)-高效液相色谱法进行4种抗生素的同时固相萃取和测定的最佳条件，结果令人满意。现将研究结果总结如下： 一、实验部分 1、仪器与试剂 LC7000型高效液相色谱仪，LC7060 二极管阵列检测器，LC7050自动进样器;SUPELCO DISCOVERY C185μm 250×4.6mm色谱柱。固相萃取小柱为ZORBAX SPE C18Cart。12头固相萃取真空富集装置(Alltech Scientific Limited)。超声波清洗器KS—500D，超速离心机LD4 —2，搅肉机，涡旋混合器。甲醇(色谱纯)，磷酸二氢钠(分析纯)，EDTA(分析纯)，高氯酸溶液(优级纯)、硝酸(优级纯)。土霉素、四环素、金霉素、氯霉素标准品(SIGMA公司)。 2、高效液相色谱分析条件 色谱柱为SUPELCO DISCOVERY C185μm 250×4.6mm，流动相为0.O1mol/L磷酸二氢钠+0.001 mol/L EDTA:甲醇=60:40(V/V，pH=2.0)，流速为0.8ml/min，检测波长为268nm柱温为25℃，进样量为20μl。 3、实验方法 (1)土霉素、四环素、金霉素、氯霉素标准储备液的配制 分别称取O.0100mg土霉素、四环素、金霉素、氯霉素标准品置于4个1Oml容量瓶中，分别加入甲醇溶解并定容至刻度，此溶液浓度分别为1.00mg/ml，置于冰箱冷藏室保存。 (2)混合标准中间液的配制 分别吸取土霉素、四环素标准储备液各1.00ml，金霉素、氯霉素标准储备液各 2.00m1.置于100ml容量瓶中，用流动相A液定容至刻度，此溶液浓度分别为：土霉素(10μg/m1)、四环素(10μg/m1)、金霉素(20μg/m1)、氯霉素(20μg/m1)，置于冰箱冷藏室保存。 (3)标准使用液的配制 准确吸取混合标准中间液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0ml分别置于1Oml容量瓶中，用流动相A液定容至刻度，得到的标准系列为：0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0μg/m1(土霉素、四环素);0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μg/m1(金霉素、氯霉素)。 (4)流动相A液的配制 0.01mol/L磷酸二氢钠+0.001mol/L EDTA，用30%硝酸调至pH=2.0，经0.45μm双层水系滤膜过滤。 (5)流动相B液的配制 (6)样品前处理 准确称取5.00g搅碎的水产品于5Oml带盖的塑料离心管中，加入20%高氯酸溶液 15ml，涡旋1min，将此离心管放入超声波清洗器中提取20min后，用离心机离心10min，收集上清液于25ml容量瓶中，往残渣中加入1Oml 2%高氯酸溶液，用玻棒搅动使样品均匀分散于高氯酸溶液中，将此离心管放入超声波清洗器中提取20min后，用离心机离心10min，收集上清液于上述 25ml容量瓶中，合并两次上清液，用2%高氯酸溶液定容，取该提取液1O ml经已调节的固相萃取小柱吸附，用10%甲醇水2ml冲洗固相萃取小柱，用50%甲醇水1ml洗脱后收集备用。 (7)样品测定 吸取样品溶液20μl进样，进行HPLC分析，记录四种抗生素的峰面积。根据4种抗生素的保留时间和紫外吸收光谱图定性，峰面积定量。 二、结果和讨论 1、色谱分离条件的选择 (1)检测波长的选择 由4种抗生素的紫外吸收光谱图可见，土霉素、四环素、金霉素在268nm、355nm处各有1个吸收峰，氯霉素在278nm处有1个吸收峰，分别在波长268nm、278nm和355nm下用高效液相色谱仪以4种抗生素的混合标准进行测定，结果表明:在波长268nm下4种抗生素色谱峰分离较好且测定灵敏度明显高于 278nm、355nm处，实际样品在此波长条件下的溶剂峰对4种抗生素的测定