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PAGE  PAGE 27 转氨作用实验报告 篇一：实验十六 转氨基作用 实验十六 转氨基作用 【目的】 氨基酸的转氨作用在体内所有器官组织几乎都能进行，但不同的组织器官ALT（GPT）的活性大小不同。 【原理】 丙氨基酸与α-酮戊二酸在Ph7.4时，经ALT催化进行转氨基作用生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用，生成棕红色丙酮酸2，4-二硝基苯腙，用颜色深浅表示酶活性大小。本实验以肝和肌进行比较。 ALT 丙氨酸 + α– 酮戊二酸谷氨酸 + 丙酮酸 37℃ 丙酮酸 + 2,4 – 二硝基苯肼丙酮酸二硝基苯腙（棕红色） 【试剂】 1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4） 称取磷酸氢二钠（Na2HPO4）11.928g,磷酸二氢钾(KH2PO4)2.176g加蒸馏水溶解并稀释至1000ml。 2．ALT基质液 称取DT-丙氨酸1.79g, α-酮戊二酸29.2mg于烧瓶中,加0.1 mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液80ml,煮沸溶解后待冷,用1mol/L NaOH调节pH至7.4(约加0.5ml),再用0.1mol/L磷酸盐缓冲液稀释到100ml,混匀加氯仿数滴置冰箱可保存数周。 3．2，4-二硝基苯肼溶液 2，4-二硝基苯肼19.8mg用10mol/L HCl 10ml溶解后,加蒸馏水100ml,置于棕色瓶内,冰箱保存。 4.0.4 mol/L氢氧化钠溶液 将16g氢氧化钠溶解于水中，并加水至1000ml。 【器材】 乳钵和细砂、滴管、试管、试管架、恒温水浴箱。 【操作】 1．将家兔处死后，立即取出肝和肌，分别以冰生理盐水洗去血液。取10g新鲜肝和肌组织，分别剪碎，加pH7.4缓冲液10ml加细砂研碎,研成匀浆后再加pH7.4缓冲液20ml混匀,用棉花过滤,此即为肝和肌的浸提液. 2.取试管2支按下表操作： 表3-18 转氨基作用操作步骤 【结果及分析】 【思考题】 比较两管颜色，说明哪种组织ALT活性高，为什么？ 篇二：12 实验十二 转氨作用 实验十二 转氨作用 【实验目的】 1．通过实验掌握水平方向滤纸层析原理和技术 2．了解转氨作用过程。 【实验原理】 转氨基作用是由转氨酶（氨基转移酶）催化的，在这个反应中，α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间交换，α-氨基酸转变成相应的α-酮酸，α-酮酸变成新的一种α-氨基酸。转氨基作用是一种可逆反应。每个转氨基反应均由专一的转氨酶所催化，在不同的生物有机体中均有转氨酶分布。 本实验是将丙氨酸和α-酮戊二酸与肝匀浆一起水浴反应，肝中的丙氨酸氨基转移酶（ALT，又称谷丙转氨酶GPT）含量丰富，该酶可将丙氨酸的氨基转移给α-酮戊二酸，产生丙酮酸和谷氨酸。利用圆盘纸层析鉴定谷氨酸的存在，并且验证组织中的转氨作用。在肝脏谷丙转氨酶(GPT)催化的转氨基作用，反应方程式如下： COOHCH2CH2C O + CH3CH NH2 COOHCH2CH2CH NH2+ CH3C O COOHα‐酮戊二酸 COOH丙氨酸 COOH谷氨酸 COOH丙酮酸 【实验材料】 1． 实验器材 培养皿；表面皿；滤纸；匀浆器；试管；试管架；恒温水浴锅；毛细管；移液管；喷雾器；剪刀；铅笔；格尺。 2． 实验试剂 ⑴ 0.01M pH7.4磷酸缓冲液：0.2MNa2HPO4溶液81ml, 0.2MNaH2P04溶液19ml混匀，蒸馏水稀释20倍。 ⑵ 0.1M丙氨酸溶液：称取丙氨酸0.891克先溶于少量0.01MpH7.4磷酸缓冲液中，以1MNa0H仔细调节至pH7.4后，用磷酸盐缓冲液加至100ml。 ⑶ 0.01Mａ-酮戊二酸溶液：称取ａ-酮戊二酸1.461克先溶于少量0.01M pH7.4磷酸缓冲液中，用1M Na0H仔细调节至pH7.4后，用磷酸盐缓冲液加至100ml。 ⑷ 0.1M谷氨酸溶液：称取谷氨酸0.735克先溶于少量0．01M pH7.4磷酸缓冲液中， 以1MNa0H仔细调节至pH7.4后，用磷酸缓冲液加至100ml。 ⑸ 0.2％茚三酮溶液：称取茚三酮0.2克溶于100ml 95％乙醇中。 (6)层析溶剂：水饱和的苯酚。 【实验操作】 1． 肝匀浆的制备： 取新鲜的猪肝5g,加入20m1预冷0.01M pH7.4磷酸缓冲液，用捣碎机迅速成匀浆(1万转大约30秒)。两人一组进行如下的实验。 2． 转氨反应： 取干燥大试管二支，分别标明测定管与对照管，按下表进行操作： 试剂(ml) 肝匀浆 测定管 0.5 对照管 0.5 0.1M 丙氨酸溶液 0.01M α-酮戊二酸溶液 0.01 M pH7.4 磷酸缓冲液 放入沸水