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炭疽检验技术; 炭疽是由炭疽杆菌引起的人兽共患急性、热性、败血性传染病。其病理变化的特点是脾脏显著肿大，皮下及浆膜下结缔组织出血浸润，血液凝固不良，呈煤焦油样。人感染后多表现为皮肤炭疽、肺炭疽及肠炭疽，偶有伴发败血症。 ;;革兰氏染色阳性； 长而直的大杆菌，菌体两端平直； 大小为1.0～1. 5um×3～5um，致病菌中最大的； 无鞭毛，不能运动。;荚膜染色 在碳酸盐培养基中、厌氧环境下生成荚膜。;在活炭疽病畜体或死亡后未经解剖的尸体内，不形成芽胞。一旦体内炭疽杆菌暴露于空气中，接触了游离氧，在一定温度下(12--42℃)就会形成芽胞。芽胞呈卵圆形或圆形，位于菌体中央或稍偏向一端。;A：炭疽芽孢薄片（透射电镜）有致密的胞膜B：炭疽芽孢（扫描电镜）收缩成椭圆形C：炭疽繁殖体薄片（透射电镜）; 炭疽杆菌为兼性需氧菌，在12～44℃都能生长，最适生长温度为37℃。最适pH为7.3～7.6。 在普通琼脂平皿培养基上生长成不透明、灰白色、扁平、表面粗糙的菌落，边缘不整齐，能形成几个或数十个菌体相连的长链，低倍显微镜观察呈卷发状。在血液琼脂平皿培养基上，生长出湿润粘稠的菌落，菌落周围不溶血。;光镜下炭疽杆菌菌落边缘呈卷发状;在血液琼脂平皿培养基上不溶血或微溶血;三、致病性与免疫性; ; 炭疽病原学检查 炭疽血清学检查 ;炭疽病原学检查 标本采集和样品处理 细菌培养 涂片、革兰染色、荚膜染色、光镜检查 Ascoli试验 动力检查 噬菌体裂解和青霉素敏感性试验 串珠试验 生化试验 炭疽PCR基因检测 ;炭疽血清学检查 标本采集和样品处理 血清中抗炭疽芽胞和毒素IgG水平检测 （酶联免疫吸附实验ELISA） 血清中抗炭疽荚膜抗体胶体金检测 ;《人间传染的病原微生物名录》;炭疽病原检验程序;采取标本时必须遵循的两条原则 1、尽可能的在抗生素治疗前采取标本； 2、除必要时并在具备条件的实验室内，不得用解剖的方式获取标本，所需的血液与组织标本，均应以穿刺方式取得。;1、血液标本 所有的疑似病例和病畜，都应采取血液标本5-10ml，标本量至少应满足下列检查的需要： 涂片进行显微镜检查； 接种培养基进行细菌分离培养； 分离血清检查抗体； 常规血液检查。 荧光定量PCR检测 2、皮肤溃疡标本 在皮肤炭疽病人溃疡边缘用棉拭子擦拭，沾取分泌物。;3、粪便与呕吐物标本 表现消化道症状的可疑病人收集粪便或呕吐物标本，特别注意选取其中混有血液的部分，置无菌的容器中。 4、痰与咳碟标本 表现为呼吸道症状的可疑病人应收集其痰液标本，无痰液者，应取供细菌分离培养用的培养基，打开平皿盖置病人口鼻10cm处；令病人对平皿咳嗽，然后迅速盖上平皿。;5、脑脊液标本 表现为脑膜刺激症状的病人，腰椎穿刺获取脑脊液。 6、尸体标本 食草动物死于炭疽时，通常会从口、鼻、肛门等腔道开口流出血液，这种血液应是首先采取的标本。如果血液已渗入土壤，则应收集混有血液的土壤作为标本。没有血液流出，或已不可能获取血液标本时，可通过穿刺心脏获得血液或穿刺肝脏等实质性脏器获得组织标本。;7、肉类标本 如果怀疑罹患炭疽的牲畜已被宰杀，或对商品肉类进行常规检查时，可剪取小块肉类标本。如有可能，特别应剪取肝脏、脾脏等富含血以及含有淋巴组织的标本。 8、毛皮或其他可疑污染物品标本 剪取小块毛皮或其他可疑物品，剪碎置无菌试管内，加适量的无菌生理盐水浸泡。;9、水标本 检查水体污染时，用广口瓶收集水样。 10、土壤标本 在牲畜死亡或宰杀的地点，应取土壤标本以供检查。一般要采集表层土壤（10cm内），每份150g左右。; 所有来自病人、病畜、尸体的标本都应首先进行直接涂片镜检。 步骤： 涂片、革兰染色及荚膜染色、显微镜检查 镜检：取末稍血液或其他材料制成涂片后，染色镜检，发现有多量单在、成对或2～4个菌体相连的短链排列、竹节状有荚膜的粗大杆菌，即可确诊。 ; 革兰染色; 荚膜染色; 采集到的标本均应进行细菌分离培养。 培养基选用血琼脂平板、营养琼脂平板和选择性平板。;标本处理： 无菌的标本，如血液或脑脊液，直接涂布上述两种平板，每平板0.1ml，组织标本应先以无菌剪刀剪开一断面，在培养基表面压印，然后以白金耳涂开。 污染或陈旧的标本，均应首先制成悬液。根据标本中含菌量的多少，可将悬液适当稀释，或经自然沉淀除去粗大沉淀物后，再10000rpm离心1分钟，取富集的沉淀物。将所得的悬液沸水浴15min，冷却后涂布上述两种平板，每平板0.1ml。; 以上的平皿在37℃孵育过夜或24小时后，观察培养情况。 粗糙不发光，