非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2与核因子—κB在糖尿病牙周炎牙周组织破坏中的作用研究的论文.docVIP

　　非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2与核因子—κB在糖尿病牙周炎牙周组织破坏中的作用研究的论文 [摘要] 目的 观察糖尿病牙周炎条件下小鼠牙周组织中非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2（ptpn2）、核因子-κb（nf-κb）的表达与牙周组织破坏的关系。方法 将4周龄健康雄性c57bl/6j小鼠随机分为正常对照组（n组）、单纯牙周炎组（p组）及糖尿病牙周炎组（dp组），每组6只。采用口内接种牙龈卟啉单胞菌法在p组建立牙周炎模型，采用腹腔注射链脲佐菌素结合高脂高糖食物与口内接种牙龈卟啉单胞菌法在dp组建立糖尿病牙周炎模型。各组动物于p、dp组末次细菌接种4周后处死，通过体视显微镜观察牙槽骨形态和附着丧失面积，采用苏木精-伊红（he）染色法观察牙周附着丧失的高度，免疫组织化学法检测牙周组织中ptpn2与nf-κb的表达强度。结果 p、dp组牙槽骨的附着丧失面积和牙周附着丧失高度均高于n组（plt;0.05），ptpn2的表达量低于n组（plt;0.05），而nf-κb的表达量则高 　　于n组（plt;0.01）。结论 在糖尿病牙周炎的发生发展过程中，nf-κb可能有促进作用，而ptpn2可能有抑制作用； 　　ptpn2的表达减少可能导致nf-κb表达增强而加重牙周组织破坏。 　　[关键词] 糖尿病； 牙周炎； 非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2； 核因子-κb 　　[中图分类号] r 781.4 [文献标志码] a [doi] 10.3969/j.issn.1000-1182.2012.06.009 　　有研究[1]显示：糖尿病患者罹患牙周炎时，其炎症反应较非糖尿病患者严重，进展迅速，易造成明显的牙周组织破坏。.如何有效地预防和治疗糖尿病患者的牙周炎，是目前临床工作中的难点之一。患牙周炎时，过度的炎症反应是造成牙槽骨等牙周组织损害的重要原因之一。侵入牙周组织的细菌能激活核因子-κb（nuclear factor-κb，nf-κb）途径，导致多种炎性细胞的活化和炎症因子的过表达，促进炎症的发生发展，最终导致牙周组织破坏[2]。有研究[3]表明：非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2（protein tyrosine phosphatase non-receptor type 2，ptpn2）在免疫、炎症反应的信号转导中具有重要的调节作用，其表达水平降低与一些免疫、炎症性疾病的发生发展密切相关。在糖尿病牙周炎条件下，牙周组织中ptpn2和nf-κb的表达与牙周组织破坏有何种关系，国内外的研究还较少。本文通过观察实验性糖尿病牙周炎小鼠模型牙周组织中ptpn2、nf-κb的表达与牙周组织破坏的关系，探讨ptpn2、nf-κb蛋白在糖尿病牙周炎中参与牙周组织损害的作用机制。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验试剂和仪器 　　链脲佐菌素（streptozotocin，stz）购自美国sigma公司；ptpn2兔抗多克隆抗体（biotech公司，美国），nf-κb鼠抗单克隆抗体（santa cruz公司，美国）； 　　sp试剂盒、dab显色试剂盒（北京中杉金桥生物技 　　术有限公司）；体视显微镜（olympus公司，日本）， 　　nikon 80i型显微镜（nikon公司，日本），2035型切 　　片机（leica公司，德国）。 　　1.2 动物分组及牙周炎小鼠模型的构建 　　4周龄16～18 g的健康雄性c57bl/6j小鼠18只（四川大学动物中心提供），随机分为3组：正常对照组（n组）、单纯牙周炎组（p组）及糖尿病牙周炎组（dp组），每组6只。n组按无特定病原体（specific patho- 　　gen free，spf）级动物常规饲养，不做任何处理。dp组喂饲高脂高糖食物，并按55 mg·kg-1腹腔注射stz，每天1次，连续注射5 d；末次注射1周后检测血糖，若血糖≥16.65 mmol·l-1确认糖尿病动物模型建立成功[4]。确认建模成功1周后，各组小鼠均给予正常饮食。p、dp组在1%戊巴比妥钠麻醉下通过口内涂布的方 　　式接种牙龈卟啉单胞菌（porphyromonas gingivalis， 　　p.gingivalis）建立牙周炎模型。p. gingivalis的密度为 　　1×109 cfu·ml-1，接种0.05 ml，连续接种5次，隔日接种。接种菌液由保存菌种p. gingivalis atcc 33277活化增菌后，挑取平板上活的单个菌落，用加入2%羟甲基纤维素的无菌pbs配成密度为1×109 cfu·ml-1的 　　菌悬液。接种时在小鼠每个后牙的龈沟内涂布菌液。末次接种4周后处死各组小鼠（处死动物前再次检测血糖确定dp组小鼠血糖值≥16.65 mmol·l-1），取上下颌组织进行观察；将上颌组织进行常规固定、脱钙、石蜡包埋，制作切片；分离下颌软组织，