实验一植物的组织培养.pptVIP

实验一植物的组织培养 实验原理 植物组织培养是指植物的任何器官、 组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化并形成完整植株的过程。其理论依据是植物细胞具有全能性。 ; 组织培养的特点是：取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制。组织培养不但是进行细胞学、遗传学、育种学、生物化学和药物学等学科研究的重要手段；而且在农学、园艺、林业和次生代谢产物工程等生产领域得到广泛的应用。 ; 培养基是植物组织培养中的主要部分，除了培养材料本身因素外，培养基的种类和成分等直接影响培养材料的生长和发育，应根据培养材料的种类和培养部位选择适宜的培养基。培养基的种类很多，不同的培养基有其不同的特点。 ;培养基的主要成分： 水 无机成分： 无机大量元素 氮： 铵态氮、硝态氮混合 磷： 磷酸盐 钾： 钾盐 钙、硫、镁 无机微量元素 主要有：铁、硼、锰、锌、铜、钼、钴、氯 有机成分： 糖、 维生素、肌醇、氨基酸及有机附加物。 植物生长调节物质： 生长素类：NAA、IAA、IBA、2,4-D 细胞分裂素类：BAP, KT，TDz，ZT 其他类： GA3, ABA， PP333 琼脂 pH值 ; 配制培养基最方便的方法是预先配制不同组分的培养基母液，贮藏在冰箱，待配制培养基时取出，按比例稀释。 配制母液时为了减少工作量可以把几种药品配在同一母液中，但是应该注意各种化合物的组合以及加入的前后顺序，应该把钙离子、锰离子、钡离子和硫酸根和磷酸根例子错开，以免发生沉淀。 把每种试剂单独溶解后再加入后一种化合物。混合已溶解的各种矿质盐时还应该注意加样顺序。 ; 铁盐单独配制，其配法为5.57g 的硫酸亚铁（Fe SO4.7H2O）和7.45g乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA）溶于1L水中，用时每配1L培养基，取该溶液5ml。 IAA 、IBA、NAA等可用少量的乙醇溶解，然后在加水定容。2,4-D可用1 N的Na OH 溶解然后再定容； KT和6-BA应先定容于少量的1 mol/L 的HCl中，再加水定容。玉米素应该溶于95% 的乙醇中再定容。 pH值对培养基的凝固情况和植物材料的生长有很大的影响，因此，等培养基配好后，应该立即调整培养基的pH ,最好用酸度计，既快又准。培养基配好后应该立即分装，体积一般为容器的 1/4 或者1/3为好。 ;器材和药品 高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、循环水式真空泵、电子天平、酸度测定仪、光照培养箱,搪瓷杯、搪瓷盘、100 ml三角烧瓶（12个/组）、250 ml三角瓶（2个/组）、试剂瓶、解剖刀柄与刀片、单面刀片、剪刀、长镊子、培养皿、移液管、漏斗、量筒、烧杯（50、100、500、1000 m1），酒精灯、火柴、玻璃棒、吸耳球、封口薄膜、牛皮纸、线绳、牛皮筋、脱脂棉、滤纸、pH试纸（5.4-7.0）、标签纸、称量纸、药勺等。; 次氯酸钠消毒液, 75%的酒精 ,0.2％的升汞溶液. 1 N 盐酸,1 N NaOH,0.8%的琼脂,3%的蔗糖. 0.1 mg/ml的2,4-D溶液：取25 mg的 2,4-D，加入少量95%的酒精和1 N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250 ml。 0.1 mg/ml 的6-BA溶液：取25 mg的6-BA，用少量1 N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250 ml。;表.1 MS培养基储备液的配制;实实验步骤 P培养基的配制 11．母液配制： 按照表 1分别配制，并在4 ℃冰箱中保存。 22.? 植物激素配制：称取10 mg NAA,加入少量酒精，并加水定容50 ml (浓度为0.2 mg/ml), 用同样的方法配制2，4-D母液。 称取 50 mg 6-BA, 加少量的1 mol/L HCl，使其充分溶解，然后加水至50 ml (浓度为1 mg/ml) 。 4?;3．