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荧光免疫层析技术的原理与进展; 荧光免疫层析技术的基本原理 层析法(chromatography)的原理是利用混合物中各组分的物理性质之差(如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)而建立来的一种分离技术。 层析系统是由固定相(stationary phase)和流动(Mobile Phase)相组成。;固定相是固体物质或固定于固体物质上的成分。 流动相是可以流动的物质，如水或各种溶剂。 层析过程：当待分离混合物随流动相通过固定相时，由于混合物各组分的理化性质的差异，与固定相相互作用弱的组分随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移的速度快；与固定相相互作用强的组分向前移动的速度慢。从而实现混合物中各组分的分离。 ; 免疫层析法 免疫层析技术是建立在层析技术和抗原一抗体特异性免疫反应基础上的一项新兴免疫检测技术。;免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛细作用使待测物在层析条上移动。 待测物在T线处发生特异性免疫反应。 游离物在C线处发生免疫反应。 ;荧光（fluorescence）;荧光效率;荧光淬灭;免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛细作用使待测物在层析条上移动。 待测物在T线处发生特异性免疫反应。 游离物在C线处发生免疫反应。 ;常用荧光免疫层析法;竞争法; 竞争法;夹心法;双抗体夹心法;双抗原夹心法;利用荧光免疫层析试纸条可以实现对待测物的定性或者定量检测.;其他;金颗粒之间存在的静电斥力使其在水中保持相对稳定的状态，形成稳定的水溶性胶体，即称为胶体金 ;胶体金既有明亮的色彩，又有高电子密度，可以吸附生物大分子，且不影响生物分子的活性，故可作为生物分子的标志物，用于免疫反应中抗原或抗体的标记定位，定性甚至定量研究。层析试纸标记用金颗粒的直径大多在 20～ 40 nm，呈深红色。;;胶体金作为标志物有以下优势: ①几乎可标记所有的蛋白分子，过程简单，效率高，用量少，便宜，基本不改变被标记蛋白的活性。且稳定，无毒，使用方便，保质期长。 ②不同直径的纳米金可以用于多重标记。 ③结果判断只需普通光学仪器或直接肉眼观察。;胶体金作为标记物的应用;试孕纸;; 应用（定量）;2 镧系元素;两种不同镧系元素离子( 分别作为光吸收子和发射子) 掺杂入亚微米尺寸的陶瓷颗粒( 作为主基质) 中，会构成一类能上转发光产生荧光的特殊材料。—— UCP( up-converting phosphor，UCP) 颗粒。;UCP 颗粒主要含有如下三种成分: 主基质：氧硫化物（Y2O2S,GdO2S）、氟化物(YF3,GdF3）、硅酸盐(YSi2O5,YSi3O7）... 吸收子Yb3+ Er3+ Sm3+ 发射子Er3+ Ho3+ Tm3+ ;UCP独特的优势;中科院报道了一种用于免疫活性检测的UCP试纸条读数计，采用半导体激光器作为光源，CCD作为光电接收器，步进电机带动控制试纸条移动的装置 ;军事医学科学院研制出一种UPT十通道免疫层析试纸盘，同时检测多种抗体以确证是否感染鼠疫菌; 霍乱弧菌—霍乱—烈性肠道传染病 甲胎蛋白(AFP）-肝癌的特异性指标。;3 量子点;①QDs 有可精确调谐的发射波长，通过调整粒子尺寸可得到不同发射光谱，即可使用大小不同的同种 QDs 颗粒实现不同颜色标记。;②较大的Stokes 位移和狭窄对称的荧光谱峰。 使得用同一激发光源可同时激发不同大小的量子点，产生不同发射光谱，??同步检测多样本成为可能。 ③QDs 荧光性质稳定，可长期保存，经受反复多次激发。 ; ④生物相容性好 物理结合 化学偶联;量子点是一种新的荧光标记物，目前在免疫层析中得应用相对UCP，胶体金较少见报道。 张国华，赖卫华等，量子点标记免疫层析试纸条快速检测莱克多巴胺的研究[J]，2009，以CdSe为标记物，对莱克多巴胺(一种苯酚胺类β-肾上腺素激动剂)快速定量检测。 胡华军，付 涛等，CdTe / ZnSe 核壳量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗的研究，2010,检测克伦特罗( Clenbuterol，CLE) —属于 β-兴奋剂类药物,又称“瘦肉精”;4有机纳米粒子;5纳米磁性颗粒;典型的是以磁性材料四氧化三铁. 表面引入活性基团，通过耦联反应与酶、抗体等生物分子结合形成生物标志物. 超顺磁性.; 6碳纳米管;CNTs 作为生物分子标志物的原理与胶体金类似，其明显的黑色在定性或半定量检测中肉眼即可见。 ;目前无论用何种方法制备 CNTs，均难以去