磁珠法土壤基因组DNA提取试剂盒.docVIP

磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案 磁珠法土壤基因组DNA提取试剂盒  PAGE \* MERGEFORMAT 5  PAGE \* MERGEFORMAT 1 磁珠法土壤基因组DNA提取试剂盒 MagBeads Soil DNA Extraction Kit 【目 录 号】SMDE-5005、SMDE-5010 【运输条件】2~25℃； 【保存条件】磁珠分散液 2~8℃；蛋白酶K -20℃；其它组分室温保存； 【试剂盒组成】 Kit Component 试剂盒组成SMDE-5005 （50T）SMDE-5010 （100T） = 1 \* GB3 ① SMDE-Buffer 1 裂解液150mL100mL = 2 \* GB3 ② SMDE-Buffer 2 裂解液220mL40mL③  HYPERLINK /link?url=QmaqRDlAzwKzV3jZUhT9ANR-V9Sohf8CiZiztacNDj8V8_s1_H1pZ_JxBJ29bgCFcJKgf-SmdIbXRoOrZZqR2awd=eqid=d806be640003b8f20000000356604a62 \t _blank Proteinase K 蛋白酶K1mL2.0mL④ SMDE Magnetic Beads 磁珠悬浮液2.5mL5mL⑤ Wash Buffer 清洗液 30mL60mL⑥ Dealcohol Buffer 除醇液30mL60mL⑦ Elute Buffer 洗脱液5mL10mL【注意事项】 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀； 使用前请检查裂解液1和裂解液2是否出现沉淀，如有沉淀请将试剂瓶置于65℃水浴中温热至液体澄清； 蛋白酶K长期不使用，请置于-20℃保存，融化后4℃保存，并尽快使用；  【产品简介】 本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的干燥土壤中提取基因组DNA。试剂盒采用独特的缓冲液体系，在裂解液环境中基因组DNA与磁珠高效结合，经过清洗和洗脱等步骤之后，可去除土壤中的杂质与腐植酸，获得高质量基因组DNA产物，OD260/OD280比值一般在1.7~1.9之间，可直接用于酶切、PCR、电泳、Southern Blot、分子标记等下游分子生物学实验。 【试剂盒说明】 样本类型样本量DNA提取范围土壤100~500μg5~15μg【自备仪器、耗材和试剂】 手动普通版：涡旋混合仪、水浴锅或金属浴、EP管（2.0mL）、EP管配套用磁力架、异丙醇、无水乙醇、RNase A溶液（100mg/mL，分散液：10mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH值8.0）。 手动高通量版：涡旋混合仪、水浴锅或金属浴、48孔尖底板、48孔板配套专用磁力架、超强磁板架48孔板专用硅胶盖、异丙醇、无水乙醇、RNase A溶液（100mg/mL，分散液：10mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH值8.0）。 【手动普通版】 本操作方法在2.0mL EP管中进行操作。 释放土壤微生物 称取100~500mg土壤样本至2.0mL EP管中，依次加入1.0mL裂解液1和20μL蛋白酶K，涡旋振荡1~3min，将土壤样本分散均匀，58℃温浴10min，期间每隔5min颠倒3次混匀内容物。 注：1)如需去除RNA，请额外加入5μL RNase A溶液；2)干燥的土壤样本请研磨至均一细小颗粒，有助于微生物的高效释放。 获得土壤基因组DNA粗液 室温、12000rpm将EP管离心5min，然后转移全部上清液至新的2.0mL EP管中。加入400μL裂解液2，颠倒混匀，再次室温、12000rpm将EP管离心5min。 核酸结合 转移全部上清液至另一只2.0mLEP管，依次加入400μL异丙醇和50μL磁珠悬浮液（提前摇晃均匀），涡旋振荡5min。 磁性分离 将EP管置于磁力架上静置约20s至磁珠吸附完全，如EP管内盖有残留磁珠，可保持EP管在磁力架上，上下颠倒2~3次，磁珠可完全被磁力架吸附。保持EP管于磁力架上，吸弃上清液，期间避免接触磁珠。 清洗 向EP管中加入600μL清洗液，将EP管从磁力架上取下，剧烈摇动使磁珠充分分散，涡旋震荡2min，磁性分离（参照步骤4操作）； 使用600μL 80%乙醇，参照上一步操作2次。 除醇 将除尽上清液后的EP管保持在磁力架上，加入600μL除醇液，快速手摇润洗吸附的磁珠表面，之后快速弃去除醇液。 注：该步骤操作时间不宜过长，且不可吹散磁珠，否则影响核酸得量。 洗脱： 向EP管中加入100μL洗脱液，移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀，将EP管置