简论抗猪瘟一猪支原体肺炎二联自家高免血清的研制.docVIP

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简论抗猪瘟一猪支原体肺炎二联自家高免血清的研制.doc

  简论抗猪瘟一猪支原体肺炎二联自家高免血清的研制  摘要通过给待出栏肥猪多次免疫猪瘟及猪支原体肺炎疫苗,制备抗猪瘟-猪支原体肺炎二联高免血清。采用ELISA及HA/HI法进行特异性抗体的监测,猪瘟抗体OD值在免疫3次后达1.920~2.399,血凝效价为1∶2048~4096;猪支原体肺炎抗体S/P值在免疫4次后达0.861~1.311。使用疫苗作为免疫原制备高免血清简单、安全、有效,可用于猪瘟、猪支原体肺炎的防控。   关键词猪瘟;猪支原体肺炎;高免血清;研制      猪支原体肺炎(Mycoplasma pneumonia of sL剂量免疫3次,2次免疫之间间隔14 d;猪支原体肺炎的免疫在猪瘟免疫后7 d进行,按照5、20、80、200 mL剂量进行4次免疫,间隔14 d。注射方法均为多点肌肉注射。   1.4采血及抗体效价检测   每次免疫后7 d进行前腔静脉采血并分离血清,分别按照相应ELISA抗体检测试剂盒说明书操作,在630 nm处检测各孔的吸光值[5-6]。猪瘟抗体效价由吸光值直接判定,并且在三免后同时采用血凝抑制法测定血凝价进行对比;猪肺炎支原体效价需计算S/P值,S/P≤0.3为阴性,S/Pgt;0.4为阳性,0.3≤S/P≤0.4为可疑,结果可按试剂盒提供的计算方法换算成终点抗体滴度:lg滴度=1.09(lgS/P)+3.36。   1.5屠宰及收集血清   在抗体效价达到要求时进行无菌放血。常规保定待宰猪,通过颈静脉插管收集全血,立即送往实验室进行血清的分离,加入适量硫柳汞及双抗后分装,-20 ℃保存。   1.6无菌检验   随机抽取制备的血清样品,接种于血液琼脂和含血清的TSA培养基,分别置于普通培养箱和CO2培养箱中37 ℃培养72 h,观察有无细菌生长。   1.7安全检验   挑选5头14~20日龄健康未免疫仔猪,按0.5 mL/kg·体重肌肉注射,观察7 d,观察仔猪有无异常反应。   2结果与分析   2.1血清抗体效价检测结果   2.1.1猪瘟抗体水平。试验猪在每次免疫后7 d采血,用ELISA法检测抗体水平,结果用OD值表示(表1)。同时,对相同的样品采用血凝抑制法测定血凝价为1∶204 8~409 6,达到高免血清要求。      2.1.2猪支原体肺炎抗体水平。试验猪在每次免疫后7 d采血检测抗体水平,结果用OD及S/P值表示(表2)。二免后全部样品均呈阳性,四免后S/P值达0.861~1.311,可以作为高免血清使用。   2.2无菌检验结果   随机抽取的血清样品接种血液琼脂和含血清的TSA培养基后,在普通培养箱和CO2培养箱中37 ℃培养72 h,未见任何细菌生长,表明无菌检验合格。   2.3安全检验结果   用无菌检验合格的高免血清对5头14~20日龄健康未免疫仔猪按0.5 mL/kg·体重进行肌肉注射,连续观察7 d,未见异常反应,表明该血清安全。   3 结论与讨论   (1)该研究猪瘟抗体效价较支原体抗体效价升高快,推测其原因:一是试验猪在该研究实施前已进行了猪瘟的常规免疫(断奶及8周龄时各注射1头份),猪瘟的一免实际上是一次加强免疫,因而免疫后抗体效价上升迅速;二是该研究选用的疫苗类型不同,猪瘟疫苗为弱毒苗,而支原体疫苗为灭活苗,这也是造成两者抗体水平不同的原因之一。   (2)制备高免血清一般采用抗原性好的活毒作为免疫原,该方法对试验环境要求很高,否则存在散毒的危险;该研究选用商品疫苗按照设计的免疫程序进行多次强化免疫,血清抗体滴度逐步升高,猪瘟抗体OD值在三免后最高达2.399(血凝效价为1∶4 096),支原体肺炎抗体在四免后S/P值最高达1.311,并且操作较为简便,除了疫苗及监测的费用外,几乎不增加饲养成本,适合规模化养殖场自行制备,用于上述2种疾病的防控。   4

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