简论环磷酰胺和环孢素A对SLE患者外周血Th细胞亚群免疫调节的作用.docVIP

　　简论环磷酰胺和环孢素A对SLE患者外周血Th细胞亚群免疫调节的作用 【摘要】 　　目的: 探讨环磷酰胺(CY)和环孢素A(CsA)对SLE患者外周血Th细胞亚群的免疫调节作用。方法: 以10例重度活动的SLE患者和6例正常对照的PBMC为研究对象, 将细胞悬液分为空白组、 植物血凝素(PHA)刺激组、 PHA+CY组、 PHA+CsA组、 CY组和CsA组分别给药, 体外细胞培养24 h后, 利用三色流式细胞术检测CD4+IL10+T细胞、 CD4+IFNγ+T细胞比例和CD8+ IL10+ T细胞、 CD8+IFNγ+T细胞等比例, 同时记录相应细胞的荧光强度。结果: CsA促进静息和活化状态下PBMC培养中表达CD4+IL10+T细胞比例增加, 同时CD4+T细胞表达IL10荧光强度增强。CY虽然促进SLE　PBMC培养中表达CD4+IL10+T细胞比例增加, 但对CD4+T细胞表达IL10的荧光强度无明显增强。CsA抑制PBMC培养中表达CD8+IL10+T细胞的比例, 同时CD8+T细胞表达IL10的荧光强度减弱。而CY虽然抑制SLE PBMC培养中表达CD8+IL10+T细胞的比例, 但CD8+T细胞表达IL10的荧光强度却是减弱的。CsA对活化状态下正常对照和SLE PBMC培养中表达CD4+IFNγ+T细胞比例的抑制作用优于CY, 且CY对SLE患者PBMC培养中CD4+T细胞表达IFNγ荧光强度抑制作用也是减弱的。CsA和CY均可抑制活化状态下, 正常对照PBMC和静息状态下SLE PBMC培养中表达CD8+IFNγ+T亚群细胞的比例, 且CY的抑制作用优于CsA。但CY对SLE PBMC培养中CD8+T细胞表达IFNγ荧光强度的增强作用不如CsA。结论: CsA和CY均能使CD4+T细胞受抑, CD8+T细胞上升。但CsA对T细胞活化, 炎症相关细胞因子表达启动的反应更为敏感, 免疫调节作用更为显著。 【关键词】 环磷酰胺 环孢素A 红斑狼疮 系统性 流式细胞术 　　SLE是一自身免疫性疾病, 其致病机制不仅涉及B细胞、 各种亚群T细胞（Th1, Th2）及树突状细胞（dendritic cells, DC）, 还涉及复杂的细胞因子网络[1, 2]。目前SLE的治疗仍以糖皮质激素（glucocorticoid, GC）及环磷酰胺（cyclophosphamide, CY）等为主, 环孢素A(cyclosporine A, CsA)及霉酚酸酯(mycophenolate mofetil, MMF)等新型免疫抑制剂治疗SLE及相关疾病亦偶见报导［3］。但对CsA、 MMF和CY等免疫抑制剂治疗SLE的药理作用具有针对性的实验研究国内外罕见报导[4]。因此, 本研究中以SLE患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMC）为研究对象, 探讨CsA、 CY两种免疫抑制剂对CD4+和CD8+细胞亚群的作用, 探讨CsA、 CY对SLE各个重要免疫病理环节的影响, 为临床合理用药提供实验依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 研究对象 10例活动性SLE患者来源于本院风湿科、 肾内科和血液科, 为本院2003-10/2004-08确诊患者, 均符合美国风湿病学会1997年推荐的SLE分类标准。6例正常对照来源于健康献血员。除1 例SLE患者为男性、 年龄为28岁外, 其余9例均为女性, 年龄13～55(28±6)岁。健康对照者6例, 均为女性, 年龄22～37(30±3)岁。 　　1.2 试剂 Ficoll分离液购自上海华精生物高科技有限公司。CY(1.0 g/支)购自Sigma公司（批号091K1176）, 临用前用RPMI1640溶解。CsA(5 mg/支)购自Sigma公司（批号093K4020）, 临用前用无水乙醇溶解。PHA购自广州生物制品公司, 用RPMI1640配成浓度为1 g/L的工作液。藻红蛋白(PE)Cy5标记的抗CD4单克隆抗体(mAb)(鼠抗人IgG1, κ, RPAT4克隆); PE标记的抗IL10 mAb(兔抗人IgG1, κ, JES39D7克隆); 异硫氰基荧光素(FITC)标记的抗IFNγ(鼠抗人IgG1, κ, 4S.B3克隆); PE标记的小鼠IgG1同种型对照免疫球蛋白(MOPC21克隆); FITC标记的小鼠IgG1同种型对照免疫球蛋白（MOPC21克隆); 蛋白质转运抑制剂、 破膜剂及固定剂均购自еBioscience公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 PBMC分离培养 采集患者肝素抗凝血10 mL, 轻轻铺于Ficoll分离液上(抗凝血与分离液体积比为2∶1),