MTA对NCM460和结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的影响.docVIP

　　MTA对NCM460和结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的影响 【摘要】 目的：探讨甲基硫代腺苷（MTA）对NCM460和结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的作用. 方法 : 采用MTT比色技术、Hoechst33258染色技术检测MTA对NCM460和RKO细胞增殖和凋亡的 影响 . 结果: MTA对结肠癌RKO细胞具有明显的抑制增殖和促进凋亡的作用， 该作用强于对结肠正常上皮细胞NCM460细胞的增殖和凋亡的影响. 结论: MTA对RKO细胞具有明显的抗肿瘤活性，对NCM460细胞的毒性较低. 【关键词】 甲基硫代腺苷；结肠/细胞学；RKO细胞；结肠肿瘤；细胞凋亡；增殖 　　【Abstract 】 AIM: To study the effects of methylthioadenosine (MTA) on proliferation and apoptosis in NCM460 cells and RKO cells. METHODS: MTT assay and Hoechst33258 staining ethylthioadenosine; colon/cy; RKO; colonic neoplasms; apoptosis; proliferation 　　0引言 　　甲基硫代腺苷(methylthioadenosine, MTA)的生物重要性被人们所认识［1］. 近年来，一些资料表明，MTA能够促进肝脏癌细胞的凋亡，同时能够抑制正常肝细胞的凋亡［2-4］. 国内外 　　1.2.2细胞调亡检测在细胞被处理16 h后，向各孔培养液中直接加入固定液2 mm（甲醛和冰醋酸按3∶1新鲜配置），2 min后吸去培养液和固定液，加入固定液5 mm固定5 min，重复固定1次. 吸去固定液，加入2 mm Hoechst33258染料溶液（10 μg/L），避光置于4℃冰箱30 min，吸去染液，加入1 mm PBS液体，避光保存于4℃冰箱，待用荧光显微镜检测细胞凋亡. 在荧光显微镜下，当出现细胞核浓染、核碎裂和凋亡小体时确定为凋亡细胞，每一孔均随机观测5个视野（图1，2），并 计算 各组凋亡细胞的百分率. 　　统计学处理：采用SPSS11.0统计软件进行方差 分析 . 　　2结果 　　2.1MTA对细胞增殖的 影响 与对照组比较，5′MTA 0.5，1，2，3 mmol/L作用16 h后，NCM460细胞存活率分别为(99.6±2.3)%，（101.5±5.0）%，（88.6±1.9）%（Plt;0.01），（82.9±1.9）% (Plt;0.01). 重复5次实验. 说明5′MTA 2 mmol/L以上可以明显抑制NCM460细胞的增殖. 与对照组比较，5′MTA 0.5，1，2，3 mmol/L 作用16 h后，RKO细胞存活率分别为(84.1±4.5)% （Plt;0.01），（69.4±5.2）%（Plt;0.01），（55.3±3.8）%（Plt;0.01），（40.9±3.5）%（Plt;0.01）. 重复5次实验. 说明5′MTA 0.5 mmol/L以上可明显抑制RKO细胞的增殖，这种诱导作用存在剂量依赖关系. 　　2.2MTA对细胞凋亡的影响 　　MTA 0，0.5，1，2，3 mmol/L作用16 h后，NCM460细胞凋亡率分别为(3.5±0.3)%，（4.6±0.6）%，（7.2±1.1）% (P=0.08)，（9.8±1.6）% (Plt;0.01)，（12.4±1.2）% (Plt;0.01). 说明MTA 2 mmol/L以上可明显诱导NCM460细胞凋亡(图1). MTA 0，0.5，1，2，3 mmol/L 作用16 h后，Hct116细胞凋亡率分别为(3.3±0.7)%，（11.0±1.4）%(Pgt;0.05)，（20.3±3.0）%（Plt;0.05），（30.1±4.1）% (Plt;0.01)，（39.3±4.4）% (Plt;0.01). 说明MTA 1 mmol/L以上可明显诱导RKO细胞的凋亡(图2)，这种诱导作用存在剂量依赖关系. 　　3讨论 　　大肠癌不仅发病率高而且易复发和转移，直接影响预后. 因此如何采取有效的 治疗 措施以降低其死亡率具有特别重要的意义. 由于化疗和放疗对正常组织、器官不可避免地产生损害或毒性作用，常成为增加剂量、提高疗效的主要障碍. 因此，寻找一种高效低毒的化疗辅助药物治疗肿瘤已成为许多学者 研究 的方向. MTA是 S腺苷蛋氨酸生成多胺过程中的一代谢产物，它对甲基化和多胺的合成具有抑制作用［5-6］. MTA能够促进肝脏癌细胞的凋亡，同时能够抑制正常肝细胞的凋亡. 但 目前 尚无有关MTA对结肠癌细胞影响的报道. 我们研究MTA对结肠