不同强度恒磁场协同顺铂促进U2骨肉瘤细胞凋亡的分子机制.docVIP

　　不同强度恒磁场协同顺铂促进U2骨肉瘤细胞凋亡的分子机制 .L.编辑。 作者：戴闽，詹平，熊高飞，熊建卫 【摘要】 ［目的］探讨不同强度恒磁场促进顺铂诱导的U2骨肉瘤细胞（U2-OS）细胞凋亡及p53、bcl-2、c-myc基因表达变化的情况。［方法］分别使用1 mT、10 mT、100 mT恒磁场和加入3.0 μg/ml顺铂的细胞培养液共同培养U2-OS细胞24 h。采用四甲基氮唑蓝比色法（MTT法）、流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测恒磁场和顺铂联合对U2骨肉瘤细胞体外增殖、凋亡及相关基因表达。［结果］不同强度恒磁场能促进顺铂对人U2-OS细胞的抑制作用，10 Gs场强下其抑制率、凋亡率最高；凋亡率达37.66%，而p53 mRNA表达最强，bcl-2、c-myc mRNA表达最弱。［结论］不同强度恒磁场协同顺铂通过诱导细胞内p53、bcl-2、c-myc基因表达的变化是其抗肿瘤的机制之一，10 Gs场强下协同顺铂的抗肿瘤作用最强。 【关键词】 骨肉瘤； 化疗； 恒磁场； 凋亡机制 Abstract: ［Objective］To approach the expression of p53，bcl-2，c-myc genes and apoptosis induced by cisplatin associated agic field at different intensities in U2-OS cells. ［Methods］Constant magic field at different intensities (10Gs, 100Gs, 1 000Gs), cell culture fluid including 3.0μg/ml cisplatin etry(FCM)or cell proliferation,gene expression and apoptosis in vitro.［Results］Constant magic field at different intensities promote the inhibitory effect of cisplatin. The effect of cisplatin agic field made the maximum inhibition rate and the apoptosis rat. The apoptosis rate aximum p53 expression,and minimum bcl-2,c-myc expression.［Conclusion］Constant magic fields at different intensities promote plus cisplatin can induce p53, bcl-2 and c-myc expression. Ten Gs of constant magic field has the strongest antineoplastic effect. Key otherapy; constant magic field; apoptosis 顺铂做为一种公认的抗骨肉瘤化疗方案中一线药物，在临床上使用广泛。但越来越多的化疗耐药及对化疗不敏感的病例出现使骨肉瘤 治疗 疗效停滞不前。通过研究不同强度的恒磁场对顺铂作用的人U2-OS细胞凋亡的分子机制，为提高骨肉瘤对化疗的敏感性提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 （1）细胞来源及其培养：人U2-OS细胞株购于 中国 科学 院典型培养物保藏委员会细胞库，在含5%CO2、37℃饱和湿度的培养箱中，用含10%胎牛血清（杭州四季青公司）的DMEM培养基（HyClone公司）培养，用0.25%胰蛋白酶（Gibco公司）消化传代。（2）药物和主要试剂：顺铂为Sigema公司实验用试剂，用生理盐水配制成1mg/ml的储存液，使用时用含10%胎牛血清的DMEM培养基稀释成3.0 μg/ml浓度。噻唑蓝 ( MTT )购于上海普飞生物技术有限公司。DMSO试剂购于Sigema公司。TRIzol试剂产自Invitrogen公司。DEPC产自Ameresco公司。M-MLV Reverse Transcriptase、Rnasin、dNTP、Oligo(dT)15均产自Promega公司。PCR引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。 1.2 方法 1.2.1 分组及处理 细胞呈对数生长后，实验分组为：①空白对照组；②阳性对照组：加入顺铂浓度3.0 μg/ml的细胞培养液；③实验组1∶加入顺铂浓度3.0 μg/ml的细胞培养液+1 mT恒磁场共培养；④实验组2：加入顺铂浓度