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②平末端：是限制酶在识别序列的中心轴线处切开形成的。如下图所示： (2)DNA连接酶、DNA聚合酶、解旋酶及限制酶的比较 作用特点 作用结果 限制性 核酸内 切酶 切割目的基因及运载体，能专一性识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开 形成黏性末端或平末端 解旋酶 将DNA两条链之间的氢键打开 形成两条脱氧核苷酸单链 DNA 聚合酶 只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上 在DNA复制过程中，单个脱氧核苷酸最终连接成与母链互补的子链，从而形成新的子代DNA分子 DNA 连接酶 将双链DNA片段“缝合”起 来，恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 将DNA 片段连接起来，形成重组DNA 3.载体 (1)作用 ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 (2)具备的条件 ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。 ②有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。 ③具有某些遗传标记基因，以便进行筛选。 【解析】　DNA连接酶连接的是磷酸二酯键；DNA分子是双链，因此切割DNA分子产生两个片段时需要两分子的水；Taq酶是热稳定DNA聚合酶，是连接单个脱氧核苷酸的，不是DNA连接酶；植物杂交育种是借助有性生殖实现，纤维素酶和果胶酶处理植物细胞获得原生质体应用于细胞工程。 【答案】　B 1.限制酶和DNA连接酶的作用部位都是DNA一条链中相邻核苷酸间的磷酸二酯键，只是一个切断，一个连接。 2．关于载体的几点说明 (1)一般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和需要，对某些天然的载体进行人工改造。 (2)常见的标记基因有抗生素基因、产生特定颜色的表达产物基因、发光基因等。 (3)作为载体必须具有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个。因为某种限制酶只能识别单一切点，若载体上有一个以上的酶切点，则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则进入受体细胞后便不能自主复制。一个载体若只有某种限制酶的一个切点，则酶切后既能把环打开接纳外源DNA片段，又不会丢失自己的片段。 (4)注意与细胞膜上载体的区别，两者的化学本质和作用都不相同。 (5)质粒能自我复制，既可在自身细胞、受体细胞，也可在体外。 1．下表为常用的限制性核酸内切酶(限制酶)及其识别序列和切割位点，由此推断以下说法中，正确的是 (　　) 限制酶名称 识别序列和切割位点 限制酶名称 识别序列和切割位点 BamHⅠ ↓ GGATCC KpnⅠ ↓ GGTACC EcoRⅠ ↓ CAATTC Sau3AⅠ ↓ GATC HindⅡ ↓ GTYRAC SmaⅠ ↓ CCCGGG (注：Y＝C或T，R＝A或G) A．限制酶切割后不一定形成黏性末端 B．限制酶的切割位点一定在识别序列的内部 C．不同限制酶切割后一定形成不同的黏性末端 D．一种限制酶一定只能识别一种核苷酸序列 【解析】　HindⅡ能识别不同的核苷酸序列，切割后不一定形成黏性末端。Sau3AⅠ的切割位点在识别序列的外部。不同限制酶切割后可能形成相同的黏性末端，如BamHⅠ与Sau3AⅠ切割的末端。 【答案】　A 2．若某种限制性核酸内切酶的识别序列是CCTAGG，它在A和G之间切断DNA。下图表示用该酶处理某基因后产生的片段。下列有关叙述正确的是 (　　) A．该正常基因中有4个CCTAGG序列 B．产生的DNA片段可用核糖核酸连接酶连接起来 C．用该酶处理得到图示基因片段要水解3个磷酸二酯键 D．若该基因某处有一个CCTAGC突变为CCTAGG，用该酶处理后将产生5个片段 【解析】　该正常基因被切为4个片段，有3个切点，应有3个CCTAGG序列；产生的DNA片段不能用核糖核酸连接酶连接，只能用DNA连接酶连接；用该酶处理得到图示基因片段要水解6个磷酸二酯键；若该基因某处有一个CCTAGC突变为CCTAGG，则有4个切点，用该酶处理后将产生5个片段。 【答案】　D 3．一环状DNA分子，设其长度为1，已知某种限制性核酸内切酶在该分子上有3个酶切位点，如下图中A、B、C三处。如果该DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生0.2、0.3、0.5三种不同长度的DNA片段。现有多个上述DNA分子，若在每个分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶酶切后，这些DNA分子最多能产生长度不同的线状DNA的种类数是 (　　) A．4　　　　 B．8　　　　 C．6　　　　 D．7 【解析】　根据切成3个片段得到0.2、0.3、0.5三种不同长度的DNA片段；切成2个片段能得到0.7、0.8、0.3、0.2、0.5五种不同长度的D