噬菌体效价测定.pptVIP

实 验 九 噬菌体效价的测定;目的要求;实 验 内 容 一培养基和实验物品的准备;本次实验准备工作（2人/组）;实 验 内 容 二噬菌体知识介绍;一、几个重要概念;2、噬菌斑： 在混浊的细菌菌面（菌苔）上形成的透明区域，是由噬菌体不断侵染宿主细胞裂解形成的，其形状、大小不等。 3、噬菌体效价： 指1mL样品中所含具有侵染活性的噬菌体（烈性噬菌体）数量——噬菌斑形成单位（pfu，plaque-forming unit）。 效价（titre，titer）这一名词在不同的场合有其不同的含义（如抗生素等）。;二、病毒粒子的构造（模型）;噬菌体的形态及分类科属;大肠杆菌T4噬菌体结构示意图;大肠杆菌T4噬菌体结构示意图及电镜照片;噬菌斑示意照片;大肠杆菌T噬菌斑的表型形态;三、噬菌体的分类——根据噬菌体与宿主菌的相互关系;四、噬菌体繁殖（生活周期）;T4噬菌体吸附和DNA的注入;T偶数噬菌体感染大肠杆菌的扫描电镜照片;T4噬菌体的生活周期;T4噬菌体的装配;五、噬菌体的应用;3、细菌感染的诊断与治疗 利用其专一性，可以诊断和治疗一些相关细菌感染性疾病（用于治疗时，其分泌的细菌素也可以应用，临床外伤治疗已有应用） 但专一性也限制了噬菌体在临床上的广泛应用（人们最需要的是广谱性）。;六、噬菌体的危害;七、以防为主的措施：;实 验 内 容 三噬菌体效价的测定;一、噬菌体效价测定的方法（梯度稀释）;噬菌体效价测定的方法;二、双层平板法;单层与双层平板法所形成的噬菌斑的比较;双层平板法的优点：;三、实验原理;四、实验步骤;3、稀释噬菌体 取1mL含噬菌体液加入到 9mL牛肉膏蛋白胨培养液中，采用10倍稀释法，分别制备噬菌体稀释液（10-5、 10-6 、 10-7 ）。 4、噬菌体与大肠杆菌敏感菌混合 将已加有大肠杆菌敏感菌9皿平板（ 10-5 、 10-6 、 10-7各3皿）中，分别加入0.1mL噬菌体稀释液，混合后放置5分钟。;5、加入上层培养基 将5mL溶化的半固体培养基中迅速倒入含噬菌体与大肠杆菌敏感菌平板中（45~50℃），并混合均匀。静止凝固。 6、培养 37℃培养2.5小时或室温培养12小时。;7、观察、计数 观察???板中的噬菌斑，将每一稀释度的噬菌斑形成单位（pfu）记录于表格内。 8、计算噬菌体的效价 选取30~300个pfu数的平板计算每毫升未稀释的原液的噬菌体效价。 噬菌体效价（pfu/ml）= 噬菌斑数×10× 稀释倍数;实验步骤框图（教师进行演示操作）;教科书介绍方法的操作步骤;思考题;2、什么因素决定噬菌斑的大小？ 3、如果在你的测定平板上，偶尔出现其他细菌的菌落，是否影响你的噬菌体效价测定？ 4、噬菌体效价测定实验中所用操作方法和书上介绍的操作方法比较有什么优缺点？;下周实验内容