中西医助理业慕师考试大纲.docVIP

***无菌检查方法学验证 为了保证本品无菌检查方法的检验质量，确保检验结果的准确性和可靠性，根据《中国药典》（2010年版）要求，我们对***的无菌检查进行了方法学验证考察。验证结果如下： 1、菌种： 大肠埃希菌[CMCC(B)44 102] 金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003] 铜绿假单胞菌[CMCC（B）10 104] 枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501] 生孢梭菌[CMCC（B）64 941] 白色念珠菌[CMCC（F）98 001] 黑曲霉[CMCC（F）98 003] 以上菌种均由中国药品生物制品检定所提供，以上菌种所用菌株传代次数均未超过5代，符合验证试验要求。 材料和仪器 2.1供试品： ***，批号滨州蓝海中医药科技研究中心提供，标示：高压灭菌。 ***，批号滨州蓝海中医药科技研究中心提供，标示：辐照灭菌（2.8kGY）。 2.2培养基： 营养琼脂培养基（批号1103162中国药品生物制品检定所） 营养肉汤培养基（批号101215中国药品生物制品检定所） 玫瑰红钠琼脂培养基（批号110222中国药品生物制品检定所） 改良马丁培养基（批号110211中国药品生物制品检定所） 改良马丁琼脂培养基（批号101028中国药品生物制品检定所） 硫乙醇酸盐流体培养基（批号110214中国药品生物制品检定所） 蛋白胨水培养物（批号100803中国药品生物制品检定所） 2.3仪器 LRH-250A生化培养箱（广东省医疗器械厂） YXQ-LS-50SII立式压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业） HH-B11-600电热恒温培养箱（天津实验仪器厂） 9240MBE数显鼓风不锈钢干燥箱（上海博迅有限公司） HZY-III型智能集菌仪（杭州高得医疗器械有限公司） 全封闭集菌培养器（杭州高得医疗器械有限公司） 2.4稀释剂 0.9%无菌氯化钠溶液 0.1%蛋白胨水溶液 菌液制备 （1）将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物分别接种至10ml营养肉汤中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基10ml中，30℃～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-3～10-8，使菌数小于100cfu/ml，见表1。 （2）接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基10ml中，30℃～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-8，使菌数小于100cfu/ml，见表1。 （3）将白色念珠菌的新鲜培养物分别接种至10ml改良马丁液体培养基中，23℃～28℃培养24～48小时，取此培养液1ml加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-6，使菌数小于100cfu/ml，见表1。 （4）将黑曲霉的新鲜培养物接种至10ml改良马丁琼脂培养基中，23℃～28℃培养5～7天，加3ml～5ml0.9%无菌氯化钠溶液，洗下霉菌孢子，吸出菌液，取1ml菌液加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4～10-6，使孢子数小于100cfu/ml，见表1。 表1 活菌预试验——活菌计数 菌 名 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 代 数 第三代 第三代 第三代 第三代 第三代 第三代 第三代 稀释级 次数 10-7 1ml 10-4 1ml 10-6 1ml 10-7 1ml 10-6 1ml 10-5 1ml 10-5 1ml 1 66 74 53 56 59 85 50 2 63 66 53 59 62 86 48 平均值 64.5 70 53 57.5 60.5 85.5 49 4培养基灵敏度检查 取每管装量为12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基9 支，分别接种小于100 cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2 支，另1支不接种作为空白对照，培养3 天； 取每管装量为9ml 的改良马丁培养基5 支,分别接种小于100 cfu 的白色念珠菌、黑曲霉各2 支，另1 支不接种作为空白对照，培养5 天。逐日观察结果。结果见表2 表2：培养基灵敏度检查结果 培养基 菌种 管数 观察结果 1d 2d 3d 4d 5d 硫乙醇酸盐流体培养基 金黄色葡萄球菌 1 + + + 2 + + + 铜绿假单胞菌 1 + + +