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样品制备变性条件直接裂解用常温或者高温预热过预热更有利于阻止蛋白水解或者磷酸酶去磷酸化但容易遗忘久煮某些性质会改变的或者略高直接加到细胞或者组织上并煮样通常孔板细胞以上密度需其他按平板面积比类推通常条件下都是过量的因此不一定要严格参考稀释比如果不够样品核酸蛋白浓度过高时煮样后会发现吸不上来非常粘一砣一砣的很容易堵住这时候常规做法有两种再煮常规煮样时间样品过浓时就煮如果煮样后仍然吸不起来才适当增加继续煮也可以对样品进行超声煮样时间若过长蛋白会凝固此时以失去继续的意义请丢弃判断标准出现明显的蛋白沉淀
样品制备： 变性条件——SDS LB直接裂解： 用常温或者高温预热过（预热更有利于阻止蛋白水解或者磷酸酶去磷酸化，但容易遗忘，LB久煮某些性质会改变）的1*SDS LB（或者略高1.5*）直接加到细胞或者组织上并煮样。通常6孔板细胞80%以上密度，需200ul，其他按平板面积比类推。通常条件下，SDS LB都是过量的（因此不一定要严格参考SDS LB稀释比）；如果SDS LB不够，样品核酸、蛋白浓度过高时，煮样后会发现tip吸不上来，非常粘、一砣一砣的，很容易堵住tip。这时候常规做法有两种，1. 再煮5min。常规煮样时间3-5min，样品过浓时就煮10min；2.如果10min煮样后，仍
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