大鼠酒精性肝损伤中PPARα mRNA表达与氧化应激的关系.docVIP

　　大鼠酒精性肝损伤中PPARα mRNA表达与氧化应激的关系 【摘要】 目的 观察大鼠酒精性肝损伤肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体α (PPARα) mRNA表达变化与氧化应激的关系，探讨PPARα在酒精性肝损伤中的作用。方法 将60只DA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力，并分析PPARα mRNA的表达与FFA水平、MDA含量、SOD活力之间的相关性。结果 与对照组比较，各观察组大鼠PPARα的表达受抑制；随造模时间延长，其表达水平呈进行性降低，特别是在12、16 RNA表达与血清FFA水平、肝组织中MDA含量之间呈负相关(P＜0.05)，与肝组织中SOD活力呈正相关(P＜0.05)。结论 PPARα表达与氧化应激关系密切，在酒精性肝损伤进程中具有重要作用。 【关键词】 过氧化物酶体增殖物激活受体α mRNA；氧化应激；酒精性肝损伤 过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARs）是一类由配体激活的核转录因子，活化后可以调控多种核内靶基因的表达，具有多种生物学效应〔1〕。研究发现，作为PPARs 亚型之一，PPARα具有调节脂肪代谢、炎症反应、免疫功能、细胞分化等作用，与诸多肝脏疾病的发生、 发展 关系密切。笔者已研究证实，PPARα表达与核因子(NF)κB、肿瘤坏死因子(TNF)α、白介素(IL)6等多种炎性细胞因子关系密切，在酒精性肝损伤炎症反应中具有重要作用〔2〕。本实验将从PPARα mRNA表达与氧化应激的关系入手，进一步探讨PPARα mRNA的表达在酒精性肝损伤发病机制中的作用。 1 材料与方法 1.1 实验动物分组 健康DA含量和SOD活力。以上均严格按照试剂盒（南京建成生物工程公司提供）操作说明操作。 按照总RNA提取试剂盒（美国BBI公司产品）操作说明提取总RNA，经变性琼脂糖电泳法检测其完整性，以随机引物（由沈阳联星生物技术有限公司设计合成并纯化，见表1）逆转录合成cDNA，分别以适量cDNA为模板进行PCR扩增反应。 表1 目的基因引物序列及反应条件 反应参数：95℃预变性2 min，然后95℃变性30 s，59℃退火30 s，72℃延伸1 min，共30个循环，反应结束前72℃加时延伸5 min。PCR产物在2%琼脂糖凝胶上80 V恒压电泳2 h，经凝胶成像系统分析成像，以βactin为内参照，目的基因PPARα与βactin的条带光密度比值（IOD）作为PPARα mRNA的相对量进行比较分析。 1.5 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件包，计量资料采用组间t检验（方差不齐时用t’检验），等级资料用秩和检验，计数资料用χ2检验。 2 结 果 实验过程中，观察组大鼠因灌胃误入气管或胃穿孔（经解剖证实）共死亡10只，其中4、12 . 图1 肝组织中PPARα的基因表达 从表4可以看出，随造模时间延长，观察组大鼠肝组织中PPARα的基因表达逐渐降低，造模12 RNA的表达表5 PPARα的表达与氧化/抗氧化指标相关性分析 3 讨 论 酒精性肝损伤致病因素单一(即长期大量的酒精摄入)，但其确切的发病机制却较为复杂，目前尚未完全明确。近年来，氧化应激在酒精性肝损伤中的重要作用已得到普遍公认。 自由基引起的氧化应激反应是诱发肝损伤的重要原因〔4〕。作为氧化应激的主要分解产物，FFA具有很强的细胞毒性，破坏细胞膜、线粒体和溶酶体膜等引起细胞内微器官损伤，而且还能明显加强细胞因子的毒性，导致肝实质变性、炎性细胞浸润和纤维化等改变〔5〕；而MDA与蛋白质结合形成的加合物，可以激活机体的免疫反应而导致肝损害〔6〕。作为体内重要的抗氧化酶，SOD能清除超氧阴离子自由基，减少脂质过氧化反应，使机体细胞和组织免受损伤，对机体的氧化和抗氧化平衡起着重要作用，是体内重要的保护细胞因子。酒精及其代谢产物可激活O2产生大量自由基，促发并加重氧化应激，减弱机体抗过氧化能力，氧化应激产物增加，使肝脏在酒精第一次打击的基础上遭受第二次打击，促使酒精性肝损伤的发生及 发展 。 本实验发现，在酒精性肝损伤的不同时间段，血清FFA水平、肝组织中MDA含量随造模时间延长逐渐增高，肝组织中SOD活力逐渐下降；而PPARα mRNA表达受抑制，随造模时间延长逐渐明显，且与血清FFA水平、肝组织中MDA含量之间呈负相关，与肝组织中SOD活力呈正相关。提示，酒精可促发并加重氧化应激，降低机体清除自由基及抗过氧化能力，体内过氧化产物增多，从而促进酒精性肝损伤的发生与发展；而PPARα mRNA与氧化应激关系密切，在酒精性肝损伤进程中具有重要意义。笔者分析认为其可能的作用机制如下：酒精及其代谢产物在损伤肝细胞（第一次打击）的同时抑制了PPARα的