传染性胰腺坏死病病毒分离株VP2基因抗原表位区.PDF

第 36 卷第 11 期 水 产 学 报 Vol.36, No. 11 2012 年 11 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Nov., 2012 文章编号: 1000-0615(2012)11-1770-06 DOI:10.3724/SP.J.1231.2012.27926 传染性胰腺坏死病病毒分离株 VP2 基因抗原表位区 融合表达及免疫特性的分析 王健楠 1, 赵丽丽 2, 刘立月 2, 连科迅 2, 李一经 2, 葛俊伟 2, 刘 敏 1* (1. 东北农业大学动物科学与技术学院, 黑龙江 哈尔滨 150030; 2. 东北农业大学动物医学学院, 黑龙江 哈尔滨 150030) 摘要: 利用 RT-PCR 方法扩增出 IPNV-ZYX 分离株主要结构蛋白 VP2 的抗原表位区基因(616 bp), 命名为 IPNV VP2 COE, 将其克隆到 pCold TF 表达载体中构建重组质粒 pCold TF-VP2 COE, 在大肠杆菌 BL21(DH5α)感受态表达, 经 SDS电泳分析, 表达蛋白约 78 ku, 用 镍离子亲和层析柱纯化该蛋白, 制备抗血清, 间接 ELISA 结果显示, IPNV (ATCC VR-1318) 细胞培养物与鼠抗 VP2 COE 蛋白血清发生特异性反应, 效价为 1∶12 800; 间接免疫荧光结 果显示, 鼠抗 VP2 COE 血清可与黑龙江某渔场已知感染 IPNV 虹鳟肝组织产生特异性的荧 光, 以上两项结果表明, 表达 IPNV VP2 COE 蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性, 为 IPNV 检测方法的建立及疫苗的制备提供理论依据。 关键词: IPNV-ZYX 分离株; VP2 COE 蛋白; 原核表达; 免疫特性 中图分类号: Q 785; S 941.41 文献标志码: A 传染性胰腺坏死病毒(infectious pancreatic ne- 有 2 个重叠的开放阅读框(ORFs), 小阅读框编码一 crosis virus, IPNV)隶属于双 RNA 病毒科, 水生双 个 17 ku 多肽 VP5, 只存在于被感染的细胞中, 在 链 RNA 病毒属, 是引起鲑科鱼类肝胰腺等内脏实 天然病毒株中不编码 VP5[5]; 大阅读框编码由 质器官出血和坏死的主要病原。由其引起的传染性 pVP2-VP4-VP3 组成的多聚蛋白前体, 分子量大小 胰腺坏死病是一种急性、高度接触性传染病, 对 为 106 ku, 在病毒成熟时, pVP2 进一步形成 IPNV 14~70 d 的稚鱼易感, 致死率高达 90%[1]。1957 年 的外衣壳蛋白 VP2(54 ku)。VP2 蛋白是 IPNV 的主 Snieszko 在美国河鳟(Salvelinus fontinalis)病鱼体内 要保护性抗原, 含有该病毒主要的血清型特异性 分离得到病毒, 1964 年 Wolf 对病毒的特性作了较 抗原决定簇和能够诱导机体产生中和抗体, 其诱 为详细的研究, 目前该病在北美、南美、欧洲、亚 导的中和抗体能