刺参甘露糖结合凝集素的原核表达纯化及生物活性分析.PDFVIP

第 ! 卷第 # 期 水产学报 5678! ,68# $% 年 # 月 ()*+,-.)//0123+031)/420,- -9:8 $% 文章编号!%%% ;%#$%$%# ; ;% )0!%8!?$@ A1B8(8$!8$%8?! 刺参甘露糖结合凝集素的原核表达#纯化及生物活性分析 李丹彤!$!谢广成!$ !丁文勇! !王秀利!$ ! 刘洋!$ !徐文琦!$ !张永攀!$ #8大连海洋大学农业部海洋水产增养殖学重点开放实验室辽宁 大连%$!% $8大连海洋大学辽宁省海洋生物资源与生境修复重点实验室辽宁 大连%$!% !8大连医科大学生物化学教研室辽宁 大连%@@$ 摘要! 为进一步研究刺参甘露糖结合凝集素#-(CTd.$的功能及提高刺参自身免疫力!对 -(C Td.基因的 41区进行原核表达%纯化并初步鉴定其生物学活性 采用 +NCB4+法扩增 -(C Td.基因编码区!经酶切鉴定%序列分析后!将其 41区 @=# LG 片段克隆至原核表达载体 G3N$#E中!得到重组质粒 G3NC-(CTd. 重组质粒转化大肠杆菌 d.$# 3!$ 感受态细胞并 经 0BNf诱导表达出分子量约 ? [9 的融合蛋白 该蛋白以包涵体形式存在!用 ,F$ W离子亲和 柱纯化 结果显示!获得高表达量的重组纯化蛋白 纯化的 ? [9 -(CTd.进行红细胞凝集 试验检测其生物学活性 凝集试验结果显示!-(CTd.凝集最小浓度为 % $: AD. 本实验成 功构建了 -(CTd.原核表达质粒!并在大肠杆菌中高效表达了 ? [9 -(CTd.蛋白!该蛋白具 有良好的生物学活性 关键词! 刺参 甘露糖结合凝集素 原核表达 蛋白纯化 红细胞凝集试验 中图分类号! V?# 1=?8@文献标志码- 免疫系统的进化经历了 @ 亿年的历程可分 #4+$ ! ; ( 4+区是 Td.分子的识别功能 为固有免疫系统和适应性免疫系统( 前者存在于 区( .0..3f-+等? 发现Td.能够增加小鼠 所有动物种属后者只见于鸟类以上的脊椎动 抗血行传播散性念珠菌病的能力( Td.在病毒 物 ( 刺 参 # %4+3)156+423K04+/1523$ 为 棘 皮 动 感染和免疫清除中起着重要作用# ( Td.的分 物而棘皮动物是高等的无脊椎动物又是最原始 子遗传学特点与感染和自身免疫性疾病发病有着 的后口动物( 它起源于寒武纪之前位于无脊椎 密切联系= ( 此外凝集素在无脊椎动物的免疫 动物与脊椎动物开始分支的进化阶段$ ( 棘皮 识别中担当重要角色% ;$ ( 动物与其它无脊椎动物一样具有先天性免疫系 越来越多的研究表明凝集素可以作为一种 统( 补体是 固 有 免 疫 系 统 最 为 重 要 的 体 液 分 新型绿色水产动物免疫增强剂能够提高水产动 子 凝集素补体途径是激活补体系统的 ! 条途 物免疫相关酶活性增强机体免疫功能(