微生物代谢控制发酵(第三章).ppt

微生物代谢控制发酵;第三章 微生物代谢控制发酵;第一节 代谢控制发酵的基本思路;代谢控制发酵工程能否获得成功，目的产物产量的高低，取决于微生物细胞自我调节控制是否能够解除或解除的程度。 能否解除微生物的自我调节控制机制，而使代谢产物大量积累是代谢控制发酵育种的关键。 ;菌体及终端产物 初级代谢产物（如酶类） 次级代谢产物（如抗生素） 大分子合成素材性产物 外源基因产物;1微生物终端产物:乳酸、酒精、CO2、乙酸、丙酮丁醇、酵母等。 2微生物生长自身必须的产物，如，糖化酶、蛋白酶、果胶酶等。 3微生物的次级代谢产物，如抗生素等 4素材性中间代谢产物，如，氨基酸、核苷酸、有机酸、核糖、乙酰辅酶A等，获得这些物质必须在遗传水平上打破微生物自身的代谢调节机制. 5微生物自身不能合成，自身也不需要的外源基因产物。;菌种选育;;相关的常用名词;加富培养基，enriched medium: 又称富集培养基。一般为在普通培养基中加入额外的营养物质的培养基。加入的额外营养物质诸如血、血清、动植物或微生物细胞的提取物等营养丰富物质。常用于菌种筛选中，使所筛选的微生物在其中生长比其它微生物迅速而淘汰掉其他微生物。 结构类似物 与代谢途径中的代谢产物结构相类似，能与代谢物一样与调节酶结合引起酶活性的变化，但不具有代谢物生理功能的一类化合物。 ;营养缺陷突变株(Auxotroph);渗漏型突变株 指遗传性障碍不完全的缺陷型。由于这种突变是它的某一种酶的活性下降而不是完全丧失，因此，渗漏缺陷型能够少量地合成某一代谢最终产物，能在基本培养基上进行少量的生长 代谢互锁 Metabolic interlock 一种代谢产物的代谢调节，受来自另外一种从生物合成途径来看似乎完全无关的终产物的控制，这种现象叫代谢互锁 ;（一）、切（阻）断支路代谢;1、营养缺陷菌株的应用;5，-肌苷酸二钠（IMP)5，-肌苷酸二钠又名肌苷酸钠，简称5‘-IMP，为白色结晶或结晶性粉末，含有约7.5分子结晶水。无臭，有特别强的鲜味。 ;枯草芽胞杆菌嘌呤核苷酸生物合成的调节机制 ;肌苷酸发酵 腺嘌呤缺陷型（Ade-） 黄嘌呤缺陷型（Xan-） 鸟嘌呤缺陷型（Gua-） ;当选用腺嘌呤缺陷型（Ade-）时，由于切断了IMP到AMP这条代谢支路，通过在培养基中限量控制腺嘌呤的含量，就可以解除腺嘌呤系化合物对PRPP转酰氨酶的反馈调节，因而可使肌苷酸得到积累。 在腺嘌呤缺陷型（Ade-）的基础上，若再诱变得到黄嘌呤缺陷型（Xan-）或鸟嘌呤缺陷型（Gua-），就可以切断IMP到GMP代谢支路，通过在培养基中限量控制黄嘌呤或鸟嘌呤的含量，就可以解除鸟嘌呤系化合物引起的反馈调节，从而增加肌苷酸的积累。;必需氨基酸： 赖氨酸（Lys）、色氨酸（Trp）、苯丙氨酸（Phe）、蛋氨酸（Met）、苏氨酸（Thr）、亮氨酸（Leu）、异亮氨酸（Ile）、缬氨酸（Val）。 ;赖氨酸生产菌株有：谷氨酸棒杆菌；北京棒杆菌；黄色短杆菌等。 合成苏氨酸蛋氨酸的途径的关键酶天冬氨酸激酶是单一酶，受苏氨酸（Thr）和赖氨酸（Lys）协同反馈抑制。 苏氨酸和赖氨酸单独一种存在时不受抑制，仅当两者共存并都过量时才起抑制作用。;谷氨酸棒杆菌Lys合成途径;赖氨酸生产菌株的调节机制 　赖氨酸生产菌株合成赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸的途径的调节机制与大肠杆菌不同。E.coli的关键酶天冬氨酸激酶是同工酶。 而上述菌种的关键酶天冬氨酸激酶不是同工酶，是单一酶，该酶受苏氨酸（Thr）和赖氨酸（Lys）的协同反馈抑制，即天冬氨酸激酶在赖氨酸或苏氨酸单独存在时不受抑制，只有当两者共同存在且都过量时才起抑制作用。 利用高丝氨酸营养缺陷型（Hom-）或苏氨酸营养缺陷型（Thr-）菌株可以使赖氨酸得到积累 ;因此，在苏氨酸限量培养时，即使赖氨酸过剩，也能进行由天冬氨酸生成天冬氨酰磷酸的反应。在苏氨酸缺陷型中，天冬氨酸半醛可以进一步转变为赖氨酸和高丝氨酸，高丝氨酸又进而转变为蛋氨酸，却不能生成苏氨酸。 在高丝氨酸营养缺陷型中，由于缺乏催化天冬氨酸-β-半醛成为高丝氨酸的高丝氨酸脱氢酶，因而菌株丧失了合成高丝氨酸的能力。这样，一方面切断料生物合成苏氨酸和蛋氨酸的支路代谢，使中间产物——天冬氨酸半醛全部转入赖氨酸的合成；另一方面，通过限量添加高丝氨酸，可使蛋氨酸、苏氨酸限量产生，因而就解除了蛋氨酸、苏氨酸对天冬氨酸激酶的协同反馈抑制，使赖氨酸得以大量积累。 ;2、渗漏突变株的应用 ; ;（二）、选育抗结构类似物突变株 ;抗结构类似物突变株也称为代谢拮抗性突变株，即诱发突变中产生的一些对高浓度的代