红光照射对创伤愈合的影响.docVIP

　　红光照射对创伤愈合的影响 【摘要】 目的： 建立双抗体夹心ABCELISA法， 研究 红光照射对创伤愈合的作用机制. 方法 ： 40名受使者随机分为4组，每组10人，A组：20 m2；B组：30 m2；C组：40 m2；D组：对照组. 红光照射45 min/次，1次/d，连续10 d，采用双抗体夹心ABCELISA法测定受试者VEGF，PDGF，TGFβ1，bFGF含量变化情况. 结果： 双抗体夹心ABCELISA法检测VEGF，PDGF，TGFβ1，bFGF具有很好的特异性，红光照射组VEGF，PDGF，TGFβ1，bFGF含量高于对照组（Plt;0.05），在30 m2红光照射时，bFGF含量最高. 结论： 红光照射加快创伤愈合与促进VEGF，PDGF，TGFβ1，bFGF分泌有关，有利于临床推广 应用 . 【关键词】 红光 创伤愈合 双抗体夹心法 酶联免疫吸附实验 　　0引言 　　红光是指波长600~700 nm，可以对生物体产生光化学作用的光线. 红光可直接作用于血管、淋巴管、神经末梢和皮下组织等而发挥着相应的 治疗 作用. 近年来有关红光的临床研究正越来越多被人们认识和重视. Reddy等［1］应用红光照射糖尿病小鼠的实验研究中发现，632 nm的红光可以使照射组小鼠的伤口愈合强度、拉力、负重力和坚韧度比对照组明显提高，总胶原浓度也明显升高. Schindl等［2］应用红光照射不同原因导致的难治性溃疡患者，所有患者的溃疡在足够的照射后均能愈合，且无明显毒副作用. 我们采用双抗体夹心法（ABCELISA）测定了红光照射对40名志愿者血管内皮细胞生长因子（VEGF），血小板衍生生长因子（PDGF），转化生长因子（TGFβ1），碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）含量的 影响 ，进一步从分子生物学角度证实红光对软组织创伤及伤口愈合的影响，为红光照射治疗软组织创伤及伤口愈合适应症提供了 理论 依据. 　　1材料和方法 　　1.1材料200609/200708选取本院40名志愿者，无光过敏史及近期服用光过敏剂者；无慢性溶血，出凝血功能异常者和无明显出血倾向者及卟啉病者. 将40名志愿者随机分为4组，每组10人. A组：20 m2；B组：30 m2；C组：40 m2；D组：对照组. 红光照射组照射1次/d，每次45 min，10次，对照组用日光灯照射，照射时间、次数和实验组相同. VEGF，PDGF，TGFβ1，bFGF标准品和单克隆抗体，生物素标记的VEGF，PDGF，TGFβ1，bFGF单抗均由本实验室制备；辣根过氧化物酶标记Streptavidin（华美生物技术有限公司）；预包被的96孔微孔检测板（Pierce公司）；显色酶底物OPD(Sigma公司)，紫外分光光度计（Amersham公司），680型酶标仪（BioRad公司），HG675型红光治疗机（深圳一体智能技术有限公司），受试人血样40份. 　　1.2方法 　　1.2.1样本采集受试者采集全血5 mL，不加抗凝剂，直接分离血清，放置-20℃冰箱备用. 　　1.2.2VEGF，PDGF，TGFβ1，bFGF含量的测定将450 μL样本稀释液加入到1.5 mL进口聚丙烯管中，再加入10 μL血清样本，加入20 μL(1 mol/L) HCL，2～8℃放置60 min，后再加入20 μL(1 mol/L) NaOH，上下混匀既用或放置-20℃冰箱备用. 单克隆抗体的生物素化标记方法，参照常规方法［4-5］. 双抗体夹心ABCELISA法测定VEGF，PDGF，TGFβ1，bFGF含量，在配置好的标准溶液中各加入25 μL待测试样品，充分混匀，37℃孵育30 min，洗涤液洗涤；加入生物素化抗体50 μL，充分混匀，37℃孵育30 min，洗涤液洗涤；加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin液100 μL，充分混匀，37℃孵育60 min，洗涤；后再加入酶底物OPD 100 μL，37℃暗处反应5～10 min，使底物显色；最后加入2 mol/L硫酸50 μL，终止反应. 在BioRad680型酶标仪上测量吸光度（A492 nm）值. 　　统计学处理：计量数据以x±s表示，应用SPSS11.0统计软件进行统计学 分析 ，统计方法采用方差分析及Duntt检验. 　　2结果 　　2.1ABCELISA法标准曲线的建立以制备的各生长因子标准浓度为横坐标，以吸光度（A492 nm）值为纵坐标作图（图1），当VEGF(系列1)浓度为32～2000 pg/mL,bFGF(系列3)浓度为16～500 pg/mL之间时，检测生长因子的浓度与其吸光度（A492 nm）值之间线性关系良好. 进行回归分析，建立ABCELISA法测定生长因子的标